EVALUACIÓN DE MÉTODOS DE RECUPERACIÓN DE VIRUS A PARTIR DE HORTALIZAS DE HOJA

RAJAL, VERÓNICA BEATRIZ; POMA, HUGO RAMIRO; MAIDANA KULESZA, MARIA NOEL

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Microbiologia; 2019

Asociacion Argentina de Microbiologia

En los últimos años se han detectado brotes de gastroenteritis víricas, donde las verduras y frutas frescas han sido identificadas como vehículos de dichos patógenos. Hasta la fecha no se ha logrado estandarizar una metodología común para la recuperación de virus patógenos a partir de matrices alimenticias, como hortalizas frescas. Dado que los virus se encuentran en bajas concentraciones en el ambiente, es indispensable una metodología de alta sensibilidad de detección. El primer paso para una buena recuperación es desprender eficazmente las partículas virales de la matriz. El objetivo de este trabajo es comparar tres buffers de elución diferentes para evaluar la eficiencia de recuperación a partir de dos tipos de hortalizas de hoja. Se inocularon artificialmente muestras de rúcula ({Eruca sativa}) y lechuga ({Lactuca sativa}) con 100 µL de tres concentraciones distintas del fago PP7, fago de {Pseudomonas aeruginosa}. Se trata de un virus de RNA, de tamaño pequeño (25 nm) y propiedades fisicoquímicas semejantes a las de poliovirus, los miembros más pequeños de la familia de los enterovirus. En primer lugar, se utilizó un buffer de Extracto de carne (BE), en segundo lugar, se probó un buffer de Glicina (G) y por último un buffer de Tris-Glicina-Extracto de carne (TGBE). Se colocaron las muestras inoculadas (10 g) en agitación continua por 2 horas a 200 rpm, probando cada uno de los buffers (90 mL), mencionados anteriormente. Luego se realizó la concentración de los virus con Polietilienglicol (PEG), se efectuó la extracción de ácidos nucleicos y se cuantificaron las copias genómicas (CG) por RT-qPCR con sonda TaqMan®. Con el buffer TGBE se recuperan 5, 17 y 20 veces más CG, que las obtenidas con el buffer G, para concentraciones virales alta, media y baja, respectivamente, en lechugas. Para las plantas de rúcula, sembradas con concentraciones virales alta, media y baja; usando el buffer TGBE se obtuvieron 15, 4 y 9 veces más CG, respectivamente, en comparación con el buffer G. Las recuperaciones de copias genómicas obtenidas con el buffer BE fueron 4, 9 y 7 veces mayores que las obtenidas con el buffer G, en lechugas sembradas con concentraciones virales alta, media y baja, respectivamente. Para rúcula inoculada con concentración alta, el buffer BE fue superior en un orden de 13 veces, en comparación con el buffer G; en rúcula inoculada con concentración viral media, usando el buffer BE, se obtuvieron 3 CG por cada CG recuperada con el buffer G; aunque en rúcula con inoculo de baja concentración no hubo diferencia en los valores de recuperación. El buffer TGBE obtuvo porcentajes de recuperación significativamente mayores que aquellos obtenidos con el buffer BE y G, en consecuencia se presenta como el más adecuado para mejorar el método de recuperación viral en matrices alimenticias. Con el buffer TGBE se obtuvieron buenos resultados aún con concentraciones virales bajas, por lo que se podría utilizar con muestras ambientales.