Hidrólisis de neohesperidina con alfa-L-ramnosidasa inmovilizada en Dacron magnetizado

GUSTAVO CÉLIZ; MIRTA DAZ; HUGO GERONAZZO; FERNANDO SORIA

Concordia, Entre Ríos, Argentina.

Congreso; XII Congreso Cytal Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2009

Falta

<!-- @page { margin: 0.79in } P { margin-bottom: 0.08in } --> Tanto en cáscaras de cítricos como en frutos pequeños abortados, existen concentraciones apreciables de flavonoides. El aprovechamiento de los residuos que genera la industria citrícola reduciría la contaminación y aumentaría el valor agregado de la actividad productiva. En el presente trabajo la enzima -L-ramnosidasa de A. terreus, producida en nuestro laboratorio, fue covalentemente inmovilizada utilizando como soporte dacron magnetizado, con el objeto de estudiar la producción de L-ramnosa y el glucósido de hesperetina mediante la hidrólisis de neohesperidina. Este flavonoide y su derivado son de potencial aplicación en la industria de alimentos, por sus propiedades antioxidantes, mientras que la L-ramnosa es utilizada como material de partida para la síntesis de compuestos orgánicos, tal como el Furaneol, que se emplea como componente de varias sustancias aromáticas en la industria de los alimentos y perfumería. La neohesperidina utilizada fue obtenida a partir de naranjitas agrias mediante un proceso desarrollado por nuestro equipo de investigación con una pureza del 98%. La enzima fue obtenida y purificada a partir de cepas de Aspergillus terreus CECT 2663. El uso de una partícula magnética en base al dacron para inmovilización de enzimas comprende primero una conversión del dacron en dacron-hidrazida. En una segunda etapa se convierten los grupos hidrazida en azida, por tratamiento con HCl y NaNO2, para la fijación covalente de la enzima. El soporte fue magnetizado por reacción con iones ferrosos (Fe2+) y ferricos (Fe3+) a pH 10 y 95oC. La actividad retenida fue de 12,7 kat/mg soporte. Para la hidrólisis de soluciones saturadas de neohesperidina se procedió de la siguiente manera: a 2 ml de sustrato de concentración 6,5 M en buffer a 50ºC; se agregaron 10,8 kat y 21,6 kat de la enzima inmovilizada respectivamente. Los tubos se incubaron a 50°C con agitación a 200 rpm. Para la hidrólisis de suspensiones de neohesperidina de concentración 2 mM (300 veces más concentrado que la solución saturada), se utilizo igual volumen de sustrato y se agrego 21,6 kat y 32,4 kat de enzima inmovilizada respectivamente. A distintos tiempos se tomaron muestras para su posterior análisis por HPLC (fase movil, acetonitrilo: agua, 32:68), con detección UV a 280 nm. Cuando se utilizo soluciones saturadas (6,5 M) de neohesperidina a 50 ºC y pH 5,5 se logró una conversión del 71% a una hora de reacción. Cuando se trabajo con suspensiones (2 mM), se alcanzo una conversión del 80% al cabo de ocho horas de reacción. Se observa la factibilidad del uso de la enzima soportada para la realización de la reacción de hidrólisis tanto en solución como en suspensión. La utilización de partículas con propiedades magnéticas como soportes para inmovilización de enzimas, presenta la ventaja que estas pueden ser separadas rápidamente de la mezcla de reacción para su reutilización, simplificando así el proceso y disminuyendo los costos operativos.