Estudios de soportes de bajo costo para la inmovilización covalente de una lipasa comercial

GUSTAVO CÉLIZ; MARIANA CABRERA; MIRTA DAZ; FERNANDO SORIA

Salta, Argentina

Congreso; XVI Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2009

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica y Universidad Nacional de Salta

<!-- @page { margin: 0.79in } P { margin-bottom: 0.08in } --> Las lipasas (triacilglicerol acilhidrolasas, E.C. 3.1.1.3) son las enzimas más utilizadasen reacciones de esterificación, hidrólisis y transesterificación, debido a su amplia especificidad de sustrato con una alta regio y enantio selectividad. Un factor que determina la aplicación de una enzima en un proceso tecnológico es su costo. Enaplicaciones industriales las lipasas se utilizan inmovilizadas debido a la facilidad de recuperación del catalizador y los productos, reutilización del catalizador, posibilidad de la operación en continuo, y viabilidad de diseño y operación del bioreactor. El uso de soportes con propiedades magnéticos para inmovilización de enzimas permiteseparar las partículas rápidamente de la mezcla de reacción.   Soportes inorgánicos tales como sílice, arcillas y tierra de diatomeas son de interés para inmovilización de enzimas por su durabilidad, alta resistencia mecánica y bajo costo.  Los objetivos de este trabajo fueron estudiar soportes de bajo costo, tales como dacron, sílice, arcilla y diatomita, para inmovilizar la lipasa comercial Palatase® 20000 L de Novozym. Para la inmovilización de la enzima se utilizaron soportes tales como dacron,montmorillonita (MMT), diatomita (TD) ferromagnéticos y sílice. Los soportes se trataron con amino propiltrietoxisilano y la activación se efectuó con glutaraldehído.Los soportes magnetizados se obtuvieron por el método de coprecipitación con soluciones de Fe2+/Fe3+ a pH 11 y 95°C. Se caracterizaron los derivados inmovilizados mediante análisis de FTIR, raman y SEM. Para determinar la eficiencia de la inmovilización se midió la actividad de cada derivado inmovilizado utilizando unareacción de transesterificación en acetona como solvente, laurato de vinilo como donador del acilo y el glucósido de flavonoide prunina como grupo alcohólico. El éster sintetizado es laurato de prunina, un compuesto de prometedora aplicabilidad como aditivo de alimentos por sus propiedades antioxidantes y antimicrobianas.La reacción de transesterificación en medio orgánico para sintetizar laurato de prunina fue viable utilizando la enzima inmovilizada covalentemente en diferentes soportes tales como TD, MMT, dacron y sílice. Se correlacionaron diferentes propiedades de los materiales utilizados con las conversiones alcanzadas. Los mejores resultados se obtuvieron cuando el soporte utilizado fue la sílice, alcanzándose una conversión próxima al 60% luego de 24 h de reacción a 50ºC. En la tabla 1 se presentan los resultados comparativos obtenidos para la reacción de síntesis a las 8 h a 50 ºC con prunina 20 mM y laurato de vinilo 200 mM en acetona. Las mayores conversiones alcanzadas están de acuerdo con el % de inmovilización de proteína.