INIQUI   05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
SELECCIÓN E IDENTIFICACIÓN MOLECULAR In silico DE LEVADURAS DE INTERÉS INDUSTRIAL
Autor/es:
HECTOR ANTONIO CRISTÓBAL; ALEJANDRA BARRIOS
Lugar:
Salta
Reunión:
Jornada; PRIMERA JORNADA DE MICROBIOLOGÍA SOBRE TEMÁTICAS ESPECÍFICAS DEL NOA; 2017
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Las levaduras poseen numerosas aplicaciones en biotecnología, tales como la fermentación de bebidas y alimentos. La microbiología enológica, tiene entre sus intereses, búsqueda y estudio de cepas de levaduras autóctonas para producir vinos con propiedades organolépticas típicas de una región. Esta práctica es llevada por bodegas y pequeños productores para el desarrollo óptimo de procesos fermentativos en vinos. Dado el interés comercial de las levaduras, es importante aislar e identificar cepas con características deseables para uso industrial. El conocimiento de las propiedades de cepas de levaduras autóctonas y selectivas permite llevar a cabo estrategias en el mejoramiento en la elaboración y calidad del vino. La taxonomía de levaduras ha enfocado su aplicación en técnicas moleculares basada en el análisis de fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos (ADN), el análisis de microsatélites, el polimorfismo longitudinal de los fragmentos de restricción del ARN ribosomal (RFLP), amplificación por reacción en cadena de la Polimerasa (PCR), secuenciación de regiones intergénicas (ITS), entre otras. El objetivo del trabajo consiste en evaluar e identificar in silico levaduras de interés para la industria del vino mediante análisis de herramientas bioinformáticas y métodos moleculares.Para una correcta identificación molecular de levaduras se realiza un aislamiento, selección y taxonomía. A partir de cebadores (ITS1, ITS3, ITS4; F63 y Lr3) obtenidos de la bibliografía se realizó una PCR in silico usando el programa Primer-Blast (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/). Las cepas amplificadas fueron caracterizadas genéticamente mediante RFLP-PCR (región ITS-5.8S) empleando Hae II, Cfo I y HinF I en el programa DNA-MAN. Los resultados obtenidos a partir de los cebadores (ITS1-ITS4), amplificaron 350 a 880 pb de longitud en las región ribosomal que comprenden ITS1, 5,8S e ITS2; en cambio el par de cebadores (ITS3-ITS4) amplificaron fragmentos de 233 a 432 pb de longitud, que incluyen gran parte de la región 5,8S e ITS2; y por último los cebadores F63-Lr3 amplifica 600 pb de la región ribosomal 26S. Todos los pares permiten identificar en la base de datos un amplio número de géneros de levaduras descriptas en uvas, tales como Saccharomyces, Pichia, Candida, Rhodotorula, Debaryomyces, Hanseniaspora, Brettanomyces, etc, entre otros grupos. El primer par de cebadores fue empleado para el análisis RFLP-PCR, donde los resultados que diferencian los géneros se observan por los diferentes tamaños de fragmentos; para Saccharomyces Hae II (4), Cfo I (2) y HinF I (3); Pichia Hae II (1), Cfo I (1) y HinF I (2); Candida Hae II (2), Cfo I (2) y HinF I (2); Rhodotorula Hae II (2), Cfo I (3) y HinF I (4); Debaryomyces Hae II (1), Cfo I (1) y HinF I (3/4); Hanseniaspora Hae II (2), Cfo I (3) y HinF I (2). Brettanomyces Hae II (2), Cfo I (3) y HinF I (2).En conclusión, las herramientas empleadas permiten la correcta taxonomía y diferenciación entre especies de levaduras de interés biotecnológico. La identificación de la microbiota autóctona con características organolépticas distintivas permite obtener un conocimiento específico de los tipos de levaduras responsables de las propiedades enológicas de la región.