Inhibición de cepas de Escherichia coli de origen clínico por Bacillus amyloliquefaciens

PETROSELLI GABRIELA; TORRES M. JULIA; HUARACHI SERGIO; AUDISIO M. CARINA

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

La bacteria Gram-negativa Escherichia coli, habita normalmente el tracto intestinal del hombre y animales; sin embargo, se han reconocido varias cepas patógenas y algunas de ellas productoras de enfermedades severas como colitis hemorrágica (CH) y síndrome urémico hemolítico (SUH). Las bacterias del género Bacillus se caracterizan por sintetizar un gran número de metabolitos con actividad biológica, como los lipopéptidos. En la bibliografía científica actual es escasa la información de cepas de Bacillus spp. con actividad inhibitoria frente a E. coli enterovirulentos. Por ello, se decidió estudiar el efecto de cepas de B. amyloliquefaciens frente a cepas de E. coli de origen clínico. La actividad biológica se evaluó en la suspensión celular (SC), en el sobrenadante libre de células (SLC) de B. amyloliquefaciens B31, Dragone3 y PGPBacCA2; en particular se evaluó la fracción de lipopéptidos (FL) de PGPBacCA2. Las cepas de E. coli (1628-15, 1679-15, 4627-15, 4591-15, 2451p-15 y ATCC 25922) fueron gentilmente cedidas por la Bqca. Grosso del Hospital Pablo Soria (Jujuy). Se utilizó el método de difusión en agar y la técnica de contacto directo. En esta última, se evaluaron 2 FL diferentes: extraída con acetato de etilo y con metanol, en diferentes concentraciones y se determinó el número de células viables cultivables de E coli 4591-15 a diferentes tiempos.En general, no se pudo observar por el método de difusión en agar actividad inhibitoria significativa de las SC y SLC de las cepas de B. amyloliquefaciens evaluadas. Cabe destacar que esta técnica puede presentar resultados de falsos negativos, por lo que se utilizó el método de contacto directo. Al evaluar la acción del SLC y de las FL de PGPBacCA2 en un contacto directo con las células de E coli 4591-15, se determinó que FL extraída con acetato de etilo (22 mg/mL) logró inhibir significativamente a esta cepa, disminuyendo su viabilidad aproximadamente 6 órdenes log luego de 6 h de contacto; mientras que en una concentración igual a 1,1 mg/mL no se observó acción inhibitoria durante las 24 h del estudio. Sin embargo, cuando se evaluó igual concentración (1,1 mg/mL) pero de una FL extraída con metanol, sí se observó disminución significativa de la viabilidad del patógeno (4 órdenes log en 4 h) comparado al control (H2O pH 8). Por otro lado, el SLC de PGPBacCA2 redujo en 3 órdenes log la viabilidad de la cepa 4591-15 apenas entraron en contacto; sin embargo el efecto antagónico no se mantuvo en el tiempo. En conclusión, el método de contacto directo permitió revelar el efecto inhibitorio significativo de los lipopéptidos sintetizados por B. amyloliquefaciens PGPBacCA2 frente a una cepa de E. coli de origen clínico. Además, con este estudio se puso en evidencia mayor efecto anti-E. coli con fracciones extraídas con metanol, lo cual estaría relacionado a su mayor efectividad de extracción de los lipopéptidos.