Bacillus amyloliquefaciens B65 aislado de una curtiembre artesanal como productor de proteasas y queratinasas de interés industrial

MARÍA JULIA TORRES; MARCELA CARINA AUDISIO; INÉS M. VIRGILI ALEMÁN; MIRTA DAZ

Montevideo

Simposio; II Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones (SiLaBB II) VII Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2016

SiLaBB-EnReBB

La utilización de enzimas en las curtiembres resulta una alternativa valiosa a los agentes químicos mejorando la calidad del cuero y reduciendo la contaminación ambiental [1, 2 y 3]. En este trabajo se presenta a la cepa Bacillus amyloliquefaciens B65 aislada de una curtiembre artesanal de la Provincia de Salta, Argentina como microorganismo con potencial biotecnológico para la producción de proteasas y queratinasas de uso industrial. La identificación filogenética a nivel de especie y sub-especie se realizó por secuenciación del ARNr 16S [4 y 5] y fragmentos del gen gyrA [6 y 7], respectivamente. Los estudios cualitativos utilizando el método de difusión en agar con caseína, leche en polvo y colágeno como sustratos proteicos demostraron la capacidad de B. amyloliquefaciens B65 de degradar tanto proteínas globulares como fibrosas [8 y 9]. Asimismo, mediante observación al microscopio electrónico de barrido (MEB) se demostró la capacidad de la cepa de degradar tanto α- como β-queratinas [10 y 11]. Finalmente, se llevó a cabo una producción de proteasas y queratinasas en medio mineral suplementado con harina de plumas a 37 ºC, pH 7, 140 rpm durante 36 h. El seguimiento de la producción se realizó en los siguientes tiempos de cultivo: 0 h ? 4 h ? 12 h ? 16 h ? 20 h ? 24 h ? 36 h. A cada tiempo se determinó el pH y las UFC/mL tanto para células viables como para esporos. De las curvas de crecimiento se obtuvo que el tiempo de generación (g) para esta cepa bajo las condiciones de producción descriptas, fue de 52 min. A cada tiempo se recuperaron los sobrenadantes libres de células (SLC) y a cada uno se le determinó la actividad proteasa [12], queratinasa [13] y cantidad de proteínas totales [14]. Las máximas actividades proteasa y queratinasa específicas se registraron a las 12h de cultivo, siendo de 0,54 UI/mg y 68,7 UA/mg, respectivamente, con una cantidad de proteínas totales de 5,06 mg/mL.[1] Rao, M.B. et al. Microbiol. & Mol. Biol. Rev. 1998, 62, 597. [2] Jaquess, P.A. J. Am. Leather Chem. As. 1999, 94, 355. [3] Thanikaivelan, P. et al. Trends in Biotech. 2004, 22, 181. [4] Sacchi, C.T. et al. Emerg. Infect. Dis. 2002, 8, 1117. [5] Sabaté, D.C. et al. Res. Microbiol. 2009, 160, 193. [6] Chun, J. y Bae, K.S. Antonie van Leeuwenhoek 2002, 78, 173. [7] Sabaté, D.C. y Audisio, M.C. Res. Microbiol. 2013, 168, 125. [8] Bergey´s Manual of systematic Bacteriology, Springer-Verlag, 2009, 3, Second ed. [9] Nilegaonkar, S. S. et al. Bioresour. Technol. 2007, 98, 1238. [10] Wang, J.J., Shih, J.C.H. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 1999, 22, 608. [11] Brandelli, A., Riffel, A. Electron. J. Biotechn. 2005, 8, 35. [12] Kunitz, M. J. Gen. Physiol. 1947, 30, 291. [13] Wainwrigth, M. Experientia 1982, 38, 243. [14] Lowry, O.H. et al. J. Biol. Chem. 1951, 193, 265.