INIQUI   05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación parcial de queratinasas producidas por Bacillus amyloliquefaciens B65 aislado de una curtiembre artesanal como productor de proteasas y queratinasas de interés industrial
Autor/es:
MARCELA CARINA AUDISIO; INÉS M. VIRGILI ALEMÁN; FERNANDO RAMOS RICCIUTI; MIRTA DAZ
Lugar:
Montevideo
Reunión:
Simposio; II Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones (SiLaBB II) VII Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2016
Institución organizadora:
SiLaBB-EnReBB
Resumen:
Las queratinas son proteínas estruturales fibrosas que constituyen los filamentosintermedios del citoesqueleto de las células animales, encontrándose en el tejidoepidérmico y sus apéndices (pelo, uñas, plumas, pesuñas, etc). Su estrucutura con unarreglo de aminoácidos hidrofóbicos que permiten un alto grado de empaquetamientoy cisteínas formando puentes disulfuros les otorgan gran estabilidad, dureza yresistencia sin perder flexibilidad, características indispensables para sus funcionesbiológicas. Son insolubles y resistentes al ataque enzimático de la mayoría de lasproteasas, como la tripsina, pepsina y papaína [1]. Sin embargo, son sustrato de untipo especial de proteasas, las queratinasas [2]. Se han descripto numerosasaplicaciones potenciales para estas enzimas en las industrias alimentaria, textil,famacéutica, de los detergentes, plásticos biodegradables, fertilizantes, del cuero ydegradación de priones.La cepa Bacillus amyloliquefaciens B65 aislada de una curtiembre artesanal de laprovincia de Salta, Argentina, es capaz de secretar enzimas que degradan almidón,proteínas solubles e insolubles como las queratinas [3]. En este trabajo se presenta lacaracterización de la queratinasa producida por esta cepa con respecto al pH óptimo,la temperatura de máxima actividad y la termoestabilidad. La producción dequeratinasas se llevó a cabo en un medio de crecimiento mínimo a base de salessuplementado con harina de plumas de gallinas como única fuente de carbono,nitrógeno y azufre. El tiempo de máxima producción fue a las 24 h con un valor deactividad queratinasa de 0,7 U/mL. La actividad fue determinada usando keratin azurecomo sustrato [4]. Se realizaron pruebas de precipitación con sulfato de amonio apartir del sobrenadante libre de células (SLC), variando el porcentaje de saturación del10 a 80% y determinando la actividad tanto en el sobrenadante como en el precipitado.Se obtuvo una queratinasa parcialmente purificada precipitando entre el 30 y el 50 %de saturación con un factor de purificación de 5,3 y un rendimiento del 9%, a la cual sele determinó el pH óptimo y la temperatura de máxima actividad que resultaron ser 8,5y 50 °C, resultados coincidentes con los obtenidos por otros autores [5] para la mismaespecie bacteriana. Los estudios de estabilidad térmica realizados en el rango de 30 a70 °C durante 6 h revelaron que esta queratinasa pierde actividad rápidamente aún 30°C, en que conserva el 60% de actividad en 6 h.Las queratinasas son enzimas útiles para aplicaciones industriales y la especiebacteriana utilizada en este trabajo es adecuada debido a su fácil manipulación yrápido crecimiento en medios de cultivo simples. Sin embargo los resultadosobtenidos, bajo rendimiento en la purificación parcial y baja estabilidad térmica indicanque se debe trabajar en estudios conducentes a la mejora de su estabilidad.[1] Lin, X., Lee, C.G. et al., Appl Environ Microbiol 1992, 58, 3271. [2] Gupta, R. ; Ramnani, P.Appl Microbiol Biotechnol 2006, 70, 21. [3] Virgili Alemán, I. M.; Daz, M. y Audisio, M.C. 2015,XJornadas de Ciencia y Tecnología de Facultades de Ingeniería del NOA, X, 812. [4]Wainwrigth, M. Experientia 1982, 38, 243. [5] Cortezi, M.; Contiero, J. et al World J Agric Sci2008, 4, 648.