INIQUI 05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Pasos preliminares para la detección de Norovirus y Adenovirus en Aguas de la Provincia de Salta empleando PCR en tiempo real
Autor/es:
H.R. POMA; V.B. RAJAL
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Jornada; Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología. Vaquerías; 2007
Resumen:
INTRODUCCIÓNEl río Arias-Arenales atraviesa la ciudad de
Salta con dirección Oeste-Este recibiendo en su recorrido las descargas de
efluentes industriales diversos, cloacales clandestinos y pluviales, además de
la disposición de desechos sólidos industriales y domiciliarios. En sus
márgenes se edificaron ilegalmente viviendas precarias y se desarrollan
actividades recreativas en donde los protagonistas son los niños. Otros autores
realizaron estudios de contaminación química y microbiológica, incluyendo
indicadores bacterianos y protozoarios, no existiendo antecedentes de estudios
virales.El monitoreo de los virus humanos en el agua
es de particular importancia, y en este sentido el Centro de Control y
Prevención de Enfermedades (USA) sugiere que los virus son el agente causal de
alrededor del 50 % de las lesiones gastrointestinales agudas. Se pueden ciertos
virus humanos como índice de la contaminación viral; algunos estudios sugieren
que los adenovirus podrían desempeñar ese rol.
Existen numerosos métodos de determinación
de virus. En los últimos años los métodos moleculares han sufrido un fuerte
desarrollo, en particular, la aplicación de PCR en tiempo real, permite obtener
resultados cuantitativos altamente específicos y sensitivos.
En este trabajo, se exponen la puesta a punto de un conjunto de
metodologías preliminares necesarias para el estudio de la calidad viral de
aguas en el río más importante de la ciudad de Salta.
METODOLOGÍA
Identificación de peligros de
contaminación. Se relevó sistemáticamente la zona de
estudio, identificando los peligros de contaminación debidos a las distintas
disposiciones y descargas que sufre el río Arias-Arenales durante su recorrido
a través de la ciudad. Asimismo, se tuvieron en cuenta también los planos de
las redes de agua potable, canales de desagüe y cloacas.
Armado y puesta a punto del sistema de
ultrafiltración. Para alcanzar el límite de detección
del método a emplear, es necesario realizar una etapa de concentración viral en
el agua, para lo que se utilizará un sistema de ultrafiltración (UF). La
eficiencia de recuperación de este sistema será evaluada empleando como control
el bacteriófago PP7, seleccionado como modelo viral por su tamaño similar al norovirus,
que representa el caso más desfavorable para la separación por tamaño.
Puesta a punto de técnicas para la
detección y cuantificación viral. Se empleará PCR en tiempo real (empleando sondas Taqman)
para la detección cuantitativa. Se optimizaron los procesos de: extracción de
ácidos nucleicos y la reacción de retrotranscripción para generar el ADNc (PP7
y norovirus).
RESULTADOS
Del relevamiento
del trayecto completo en el que el río Arias-Arenales atraviesa la ciudad de
Salta se seleccionaron 16 puntos que representan los mayores peligros de
contaminación. Entre estos lugares se destacan la confluencia del río con
canales de desagüe que atraviesan sectores de la ciudad que carecen de cloacas,
basurales en las márgenes del río, descargas de la planta de tratamiento de
efluentes, sector de proximidad entre el río y el basurero municipal San
Javier, asentamientos urbanos precarios, entre otros.
Se puso a punto la cuantificación de PP7
empleando RT-PCR en tiempo real en dos tubos y recuento de unidades formadoras
de placas, métodos que se aplicarán para verificar el eficiente funcionamiento
del sistema de UF.
CONCLUSIONES
Los pasos preliminares realizados y la
correcta manipulación de todas las metodologías mencionadas originan el marco
inicial adecuado para su implementación en la detección de norovirus y
adenovirus en aguas de la provincia de Salta.
