INIQUI   05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Cuantifación de indicadores de riesgo sanitario en aguas mediante PCR en tiempo real
Autor/es:
B. ADRADOS; F. CODONY; R. AGUDELO; M. FITTIPALDI; V. RAJAL; G. PEÑUELA; J. MORATÓ
Lugar:
Cali, Colombia
Reunión:
Congreso; Foro Latinoamericano de Saneamiento. Saneamiento básico y ambiental: un desafío por la vida.; 2007
Resumen:
Con el
propósito de disponer de métodos más rápidos y sensibles de monitorización de
sistemas de tratamientos de aguas, así como evaluación de calidad de aguas de
diferentes orígenes, se ha optimizado la detección de una
batería de indicadores basada en la técnica de PCR en tiempo real. La
tecnología desarrollada permite detectar y cuantificar los niveles de diversos
indicadores individualmente, como son: Legionela pneumophila, Helicobacter
pylori, E. coli 0157, Adenovirus,
Cryptosporidium parvum. También se ha
desarrollado una técnica para detectar y cuantificar en una misma reacción de
PCR (multiplex) dos indicadores bacterianos de contaminación
fecal, como son Bacteroides fragilis
y Enterococus faecalis. Esta última
tiene especial interés ya que permite reducir en gran medida los tiempos de
detección. Los
diferentes métodos se han puesto a punto primero mediante ensayos a
partir de cultivos puros de concentración conocida y posteriormente se han aplicado
y validado en muestras de aguas de diferentes orígenes. Los resultados se han comparado
con análisis microbiológicos convencionales que se realizaron en paralelo.
En la
actualidad, el grupo trabaja en la aplicación de una técnica que complementa la
detección-cuantificación con PCR pues permite diferenciar entre células viables
y no viables, habiéndose obteniendo hasta el momento resultados bastante
satisfactorios. Ésta se basa en la actividad de la molécula de Propidium
Monoazide que ingresa selectivamente a las células con membrana citoplasmática
dañada o comprometida, se intercala en el ADN y por fotoactivación se une a
éste por entrecruzamiento, bloqueando su amplificación. Hasta hoy uno de los factores que dificultaba la interpretación de resultados
mediante la técnica de PCR en tiempo real era el desconocimento de la
proporción exacta de microorganismos potencialmente patógenos. Mediante esta
protocolo, se pueden realizar análisis en corto tiempo y dar
resultados específicos, cuantitativos y reproducibles, que son de utilidad
tanto para la realización de estudios de evaluación cuantitativa del riesgo
sanitario, como para la toma de decisiones en salud pública. En concreto,
nuestro grupo está trabajando para su aplicación como indicador en sistemas de
reutilización de aguas residuales regeneradas, para el riego de cultivos
horto-frutícolas. La técnica también se está
aplicando para analizar la eficiencia de eliminación de microorganismos en
sistemas de tratamiento de aguas, tanto convencionales como sistemas naturales
(humedales construidos de flujo subsuperficial), y permitirá no sólo mejorar el
conocimiento del sistema en cuanto al rendimiento de eliminación de patógenos,
sino también obtener datos de forma rápida que permitan mejorar el diseño de
los humedales construidos.