INIQUI   05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Cuantifación de indicadores de riesgo sanitario en aguas mediante PCR en tiempo real
Autor/es:
B. ADRADOS; F. CODONY; R. AGUDELO; M. FITTIPALDI; V. RAJAL; G. PEÑUELA; J. MORATÓ
Lugar:
Cali, Colombia
Reunión:
Congreso; Foro Latinoamericano de Saneamiento. Saneamiento básico y ambiental: un desafío por la vida.; 2007
Resumen:
Con el propósito de disponer de métodos más rápidos y sensibles de monitorización de sistemas de tratamientos de aguas, así como evaluación de calidad de aguas de diferentes orígenes, se ha optimizado la detección de una batería de indicadores basada en la técnica de PCR en tiempo real. La tecnología desarrollada permite detectar y cuantificar los niveles de diversos indicadores individualmente, como son: Legionela pneumophila, Helicobacter pylori, E. coli 0157, Adenovirus, Cryptosporidium parvum. También se ha desarrollado una técnica para detectar y cuantificar en una misma reacción de PCR (multiplex) dos indicadores bacterianos de contaminación fecal, como son Bacteroides fragilis y Enterococus faecalis. Esta última tiene especial interés ya que permite reducir en gran medida los tiempos de detección. Los diferentes métodos se han puesto a punto primero mediante ensayos a partir de cultivos puros de concentración conocida y posteriormente se han aplicado y validado en muestras de aguas de diferentes orígenes. Los resultados se han comparado con análisis microbiológicos convencionales que se realizaron en paralelo.   En la actualidad, el grupo trabaja en la aplicación de una técnica que complementa la detección-cuantificación con PCR pues permite diferenciar entre células viables y no viables, habiéndose obteniendo hasta el momento resultados bastante satisfactorios. Ésta se basa en la actividad de la molécula de Propidium Monoazide que ingresa selectivamente a las células con membrana citoplasmática dañada o comprometida, se intercala en el ADN y por fotoactivación se une a éste por entrecruzamiento, bloqueando su amplificación. Hasta hoy uno de los factores que  dificultaba la interpretación de resultados mediante la técnica de PCR en tiempo real era el desconocimento de la proporción exacta de microorganismos potencialmente patógenos. Mediante esta protocolo, se pueden realizar análisis en corto tiempo y dar resultados específicos, cuantitativos y reproducibles, que son de utilidad tanto para la realización de estudios de evaluación cuantitativa del riesgo sanitario, como para la toma de decisiones en salud pública. En concreto, nuestro grupo está trabajando para su aplicación como indicador en sistemas de reutilización de aguas residuales regeneradas, para el riego de cultivos horto-frutícolas. La técnica también se está aplicando para analizar la eficiencia de eliminación de microorganismos en sistemas de tratamiento de aguas, tanto convencionales como sistemas naturales (humedales construidos de flujo subsuperficial), y permitirá no sólo mejorar el conocimiento del sistema en cuanto al rendimiento de eliminación de patógenos, sino también obtener datos de forma rápida que permitan mejorar el diseño de los humedales construidos.