Síntesis de alfa-L-ramno-ß-D- glucósidos catalizada por alfa-L-ramnosidasa de Aspergillus níger

MARÍA RITA MARTEARENA; JUANA ROSA DE LA FUENTE; MIRTA ELIZABETH DAZ; GUILLERMO VON ELLENRIEDER

Mar del Plata, Argentina

Simposio; XVI Simposio Nacional de Química Orgánica; 2007

Sociedad Argentina de Investigación en Química Orgánica

<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:"Arial Rounded MT Bold"; mso-font-alt:Tahoma; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:swiss; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:3 0 0 0 1 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES-UY; mso-fareast-language:ES;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La síntesis de oligosacáridos y derivados tiene un constante incremento en la industria farmacéutica y de alimentos por sus potenciales aplicaciones. Varias glicosidasas han demostrado eficiente actividad catalítica en la síntesis de estos compuestos usando carbohidratos como dadores o aceptores glicosílicos. Estas enzimas tienen alta estereoselectividad pero baja regioselectividad. El objetivo de este trabajo es la síntesis de oligosacáridos utilizando L-ramnosa y exceso de D-glucosa, catalizada por α-L-ramnosidasa de A. niger HPS 11518, por hidrólisis inversa. Se incubaron en tubos con cierre hermético soluciones de L-ramnosa (6-deoxi-manosa) (1,16 M) y D-glucosa (4,23 M) en presencia de 280 U/mL de la enzima (unidades de actividad  hidrolítica sobre p-nitrofenil-α-L-ramnopiranósido) a 50 °C y pH 4,0. Las concentraciones de reactivos y productos fueron medidas por HPLC utilizando una columna NH2 con acetonitrilo/agua 90:10 como eluyente, flujo de 1 mL/min y detector índice de refracción. En los cromatogramas obtenidos se observaron cuatro picos que crecieron con el tiempo de reacción. Dos de los productos fueron identificados por comparación con los estándares de rutinosa (6-O-α-L-ramnopiranosil-D-glucopiranosa) y neohesperidosa (2-O-α-L-ramnopiranosil-D-glucopiranosa), obtenidos por hidrólisis ácida de hesperidina (naringenina-7-β-rutinósido) y naringina (naringenina-7-β-neohesperidósido) respectivamente. Las estructuras de estos compuestos y la del isómero 3-O-α-L-ramnopiranosil-D-glucopiranosa fueron confirmadas por técnicas espectroscópicas de RMN 1D: 1H y 13C RMN, DEPT y 2D: 1H,1H COSY, HSQC, HMBC.  Los rendimientos referidos a L-ramnosa inicial fueron de 22,1 % para rutinosa, 3,3 % para neohesperidosa y de 2,1 % para el isómero con unión glicosílica α (1→3). El compuesto obtenido con un rendimiento del 1,2% fue confirmado por HPLC y corresponde al producto de la autoramnosilación de L-ramnosa. La posición de la unión glicosílica en el producto de síntesis con mayor rendimiento fue confirmada fehacientemente por los entrecruzamientos H/C en el experimento HMBC. En la figura se indican las correlaciones más relevantes que permitieron confirmar la unión glicosílica α(1→6).                                              La enzima α-L-ramnosidasa de Aspergillus niger HPS 11518 cuando cataliza la ramnosilación de la D-glucosa por hidrólisis inversa, no tiene una selectividad del 100% de la unión α(1→6), si bien tiene una alta preferencia por esta unión frente a las uniones α(1→2) y α(1→3).