Análisis de la envoltura celular de Lactobacillus johnsonii CRL1647, cepa con propiedades probióticas para la abeja melífera

NOVICOV FANCIOTTI MARIANA; AUDISIO MARCELA CARINA

Córdoba

Congreso; XV JORNADAS ARGENTINAS DE MICROBIOLOGIA; 2014

En el grupo de trabajo se ha estudiado los últimos años el impacto del tratamiento de colmenas de Apis melifera L. con Lactobacillus johnsonii CRL1647 y se ha observado un importante efecto probiótico: aumento en el área de postura, mayor población de abejas y de almacenamiento y rendimiento en miel y menor prevalencia de enfermedades como varroasis y nosemosis. En este trabajo, se decidió analizar las estructuras superficiales involucradas en el fenómeno de adhesión observada in vitro para esta cepa ya que posiblemente participan en la interacción hospedador-microorganismo. Se cultivó L. johnsonii CRL1647 en caldo MRS al 5% p/v a 37°C durante 18 h en condiciones de microaerofilia. Rhodotorula mucilaginosa se utilizó como control positivo de hemaglutinación y creció en agar extracto de malta 5% p/v a 30°C por 48 h. Luego se lavaron dos veces con SF antes y después de los siguientes tratamientos con: I) metaperiodato de sodio 100mM pH 4,6; II) tripsina 1mg/mL; III) proteinasa K 1mg/mL y IV) pepsina 1mg/mL, a 37°C por 1 h. Por último se ajustó la concentración celular a 8×108 ufc/mL. Posteriormente, la capacidad de adherencia fue evaluada por la afinidad de las células de lactobacilo a eritrocitos humanos grupo A y O, y de carnero enfrentando volúmenes iguales de la suspensión bacteriana con una suspensión al 2% de hematíes en microplaca con fondo en U, que fue incubada por 30min a 37°C y luego a 4°C durante 4 h. Se observó que L. johnsonii CRL1647 fue capaz de aglutinar los eritrocitos de carnero pero no los glóbulos rojos de origen humano. Esta propiedad no se vio modificada por acción de pepsina y tripsina mientras que sí se vio afectada por los tratamientos con metaperiodato de sodio y proteinasa K. Cabe destacar que cuando se analizaron polisacáridos capsulares mediante tinción negativa, se encontró que esta cepa no posee cápsula. De los resultados obtenidos, se concluye que L. johnsonii CRL1647 posee en su superficie moléculas de naturaleza glucoproteicas que adhieren eritrocitos de carnero aglutinándolos, pudiendo ser éstas un importante determinante de promoción del efecto benéfico de este microorganismo con propiedades probióticas.