Efecto de bacteriocinas sobre cepas sensibles y resistentes de Listeria monocytogenes

IBARGUREN, CAROLINA; RAYA, RAÚL; APELLA, MARÍA C.; AUDISIO, M. CARINA

S.M. de Tucumán, Argentina

Simposio; 1- II Simposio Internacional de Bacterias Lácticas y Primer Encuentro red BAL (Bacterias Lácticas); 2006

Abstract Efecto de bacteriocinas sobre cepas sensibles y resistentes de Listeria monocytogenes C.Ibarguren (1), RR Raya (2), MC Apella (2,3), MC Audisio (1) (1) INIQUI-CONICET, UNSa. (2) CERELA-CONICET, (3) UNT BsAs 177, 4400 - Salta. Argentina. CE ibarguren @unsa.edu.ar Listeria monocytogenes es un patógeno potencial para personas mayores, niños, embarazadas, inmunodeprimidos y enfermos de SIDA. Nisina  es la bacteriocina comercialmente aceptada y utilizada para inhibir Listeria en productos alimenticios. Sin embargo, algunos investigadores han detectado la aparición de cepas de L. monocytogenes espontáneamente resistentes a nisina y a bacteriocinas de la clase IIa. Enterococcus faecium Mori, cepa aislada de una muestra de miel, sintetiza bacteriocinas con un fuerte efecto anti-Listeria. En este trabajo, se presenta la caracterización genética de estos compuestos y los resultados de su acción sobre cepas sensibles y resistentes de L. monocytogenes. Los genes estructurales de bacteriocinas  fueron amplificados por la técnica de PCR específica en muestras de ADN extraído deEnt. faecium utilizando  los siguientes primers específicos: EntA, EntB, EntP, Ent31 y Ent50. Se analizaron dos cultivos diferentes de L. monocytogenes: la cepa 99/287, sensible a las bacteriocinas y la cepa 99/287 MoriR, clon espontáneamente resistente a dichos compuestos. Este clon se originó como colonia satélite en el halo de inhibición al analizar la producción de bacteriocinas por el método de difusión en placa. El efecto antagónico de las mismas sobre las diferentes cepas de L. monocytogenes se analizó mediante la técnica de la microplaca en la cual se puso en contacto directo sobrenadantes libres de células (SLC) de la cepa productora con un cultivo de 14h de las diferentes cepas indicadoras. El número de células viables de Listeria se determinó por recuento en placas en BHI agar en el primer caso y en agar selectivo para Listeria en el segundo caso. Las placas se incubaron a 37ºC durante 24 h. Las bacteriocinas en estudio resultaron ser termoestables (toleran 121ºC durante 15 min), sintetizadas aún a temperaturas  bajas (4ºC) y activas sin purificación previa. Los productos de la amplificación de los genes estructurales de  bacteriocinas evidenciaron que Ent. faecium sintetiza las enterocinas A y B. La viabilidad de la cepa resistente de Listeria decrece por la acción de las enterocinas pero en una proporción significativamente menor que la de la cepa sensible.El número inicial de células viables de Listeria (8,95 log UFC/mL), en contacto con SLC de Ent. faecium durante 24h, disminuyó tres órdenes de magnitud para la cepa sensible mientras que no fue alterado para la cepa resistente. Sin embargo, el número de células viables de Listeria (6,05 log UFC/mL) disminuyó a 3,60 y 5,43 log UFC/mL para la cepa sensible y resistente, respectivamente luego de 24h de contacto con un cultivo de la cepa productora. Este resultado nos permite sugerir que los modos de acción de las enterocinas diferentes, siendo bactericida para la cepa sensible y bacteriostático para el clon resistente.