Selección y caracterización de cepas del género Bacillus productoras de lipopéptidos con actividad antimicrobiana

SABATÉ, DANIELA C.; CARRILLO, LEONOR; AUDISIO, M. CARINA

Córdoba

Congreso; 6- Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2006

abstract SELECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE CEPAS DEL GÉNERO BACILLUS PRODUCTORAS DE LIPOPÉPTIDOS CON ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Daniela C. Sabaté1, Leonor Carrillo2 y M.C. Audisio1 1INIQUI–CONICET, UNSa, 2Fac. Cs. Agrarias, UNJu. Bs. As. 177, 4400, Salta, Argentina. C.electrónico: dcsabate@unsa.edu.ar Tema: Inocuidad   Las bacterias del género Bacillus se caracterizan por sintetizar una serie de metabolitos con propiedades tensoactivas, antibacterianas y/o antifúngicas. Los biosurfactantes tienen aplicación en bioremediación de suelos y/o aguas, en industria textil, farmacéutica y de cosméticos como emulsionantes, etc. El potencial biotecnológico es su obtención a partir de microorganismos que permiten menor impacto ambiental por su origen biológico y mayor velocidad de producción. El objetivo de este trabajo fue aislar y seleccionar bacterias del género Bacillus de abejas y/o miel productoras de metabolitos con algunas de estas propiedades. Los aislamientos se realizaron en medio BHI agar y las cepas se seleccionaron según la morfología de la colonia. La actividad antimicrobiana, tanto de las suspensiones celulares como de los sobrenadantes libres de células (SLC), fue analizada por el método de difusión en placa y se utilizaron como cepas indicadoras Listeria monocytogenes, Bacillus sp., Candida sp., Fusarium verticilloides, Fusarium chlamidosporum, Ascosphaera apis, Penicillum ulaiense, Aspergillus fumigatus y Aspergillus flavus. Las cepas preseleccionadas fueron tipificadas según pruebas bioquímicas específicas del género Bacillus. Los SLC fueron caracterizados fisicoquímicamente (efecto de diferentes enzimas proteolíticas, lipasas, temperatura). La síntesis de diferentes lipopéptidos se analizó en los SLC luego de su precipitación con HCl y posterior recuperación con metanol. En dichas fracciones se detectó la presencia de surfactina por HPLC y se usó como patrón surfactina de Sigma. De un total de 41 aislamientos, se seleccionó una cepa procedente del tracto gastrointestinal de una abeja, por el amplio espectro antimicrobiano que presentó sobre cepas de Listeria monocytogenes bacteriocina-resistentes y mohos. Por pruebas bioquímicas, esta cepa fue tipificada como Bacillus subtlis G2III. El/los compuesto/s que presentaron actividad anti-Listeria mantuvieron actividad luego de un calentamiento a 100°C durante 10 minutos pero no toleraron el tratamiento en autoclave (121ºC durante 15 minutos). Las enzimas tripsina, pronase E, proteinasa K y a-quimiotripsina inhibieron el efecto anti-Listeria pero pepsina y lipasas no modificaron esa propiedad. Estos resultados nos permiten presumir la síntesis de algún compuesto tipo-bacteriocina. El análisis por HPLC reveló la síntesis de surfactina ya que el perfil cromatográfico del metabolito recuperado fue idéntico al patrón. El fuerte efecto antifúngico observado podría deberse a la producción de iturinas. Por las propiedades encontradas B. subtilis G2III presentaría potenciales aplicaciones biotecnológicas como bioprotector en la industria alimentaria.