Aplicación de nuevas técnicas para el diagnóstico de virus de Influenza A en Salta, Argentina

HUGO R. POMA; VIVIANA RASKOVSKY; ALBERTO GENTILE; VERÓNICA B. RAJAL

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010

Introducción: Hasta inicios del año 2009 los virus Influenza que circulaban en nuestro país fueron cepas de Influenza A subtipos H1N1 y H3N2 estacionales. En el año 2009 surgió un nuevo virus Influenza A con material genético de diferentes orígenes, al que se lo llamó Influenza A (H1N1) pandémico. Ante la rápida propagación de esta nueva especie viral, la Organización Mundial de la Salud declaró la pandemia, lo que significó un gran desafío a nivel mundial para desarrollar técnicas rápidas, sensibles y específicas en el diagnóstico que permitieran tomar medidas sanitarias oportunas. Objetivo: Realizar el diagnóstico de Influenza A (H1N1) empleando métodos sensibles, rápidos y específicos en Salta, Argentina Materiales y Métodos: Se analizaron muestras (hisopados y aspirados nasofaríngeos) de pacientes ambulatorios y hospitalizados, incluyendo todos los grupos etarios, de la provincia de Salta. A partir de la semana epidemiológica 35 del año 2009 se aplicó la siguiente metodología de trabajo. Panel de virus respiratorios (Influenza A, Influenza B, Adenovirus, Virus Sincicial Respiratorio, Parainfluenza Virus) utilizando técnicas de Inmunofluorescencia indirecta con anticuerpos monoclonales específicos para cada tipo de virus, según se venía trabajando en años anteriores en la Unidad Centinela (Hospital del Milagro). La totalidad de las muestras de las semanas epidemiológicas 35 y 36 fueron también analizadas mediante RT-PCR en tiempo real (qRT-PCR) para identificación de Influenza A (H1N1) pandémico. Los ácidos nucleicos fueron extraídos empleando kits comerciales (Invitrogen) y el protocolo empleado para qRT-PCR fue el publicado por el Center of Disease Control (USA, Abril 2009). Las actividades se dividieron coordinadamente en dos estaciones de trabajo: recepción, toma de muestras y extracción de ácidos nucleicos en Hospital del Milagro y diagnóstico molecular en Laboratorio de Aguas de la Universidad Nacional de Salta, empleando un equipo GenAmp Sequence Detection 5700 (Applied Biosystems). Resultados: De las 157 muestras analizadas en Salta en las semanas epidemiológicas 35 y 36, 141 (89%) dieron negativas por IFI y 16 (11%) positivas para Influenza A. Por qRT-PCR 74 muestras (47%) dieron positivas para A y en 83 (53%) muestras no se detectó genoma de Influenza A pandémico. De las 74 muestras positivas para Influenza A, 43 (58%) fueron virus Influenza A (H1N1) pandémico y 31 no se pudieron subtipificar. Conclusiones: La aplicación de qRT-PCR ha resultado exitosa para realizar el diagnóstico del virus de Influenza A (H1N1) pandémico, permitiendo recuperar un gran porcentaje de muestras que fueron IFI negativas. El contar con  resultados rápidos y específicos permitió tomar decisiones adecuadas minimizando el impacto en salud pública.