INIQUI   05448
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES PARA LA INDUSTRIA QUIMICA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Determinación de las condiciones óptimas de expresión de β-glucosidasa de Shewanella sp. G5 por qPCR
Autor/es:
H.A. CRISTÓBAL; H. R. POMA; V.B. RAJAL; C. ABATE
Lugar:
Montevideo
Reunión:
Congreso; XX Congreso Latinoamericano de Microbiología, IX Encuentro Nacional de Microbiólogos; 2010
Institución organizadora:
Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM)
Resumen:
Las glicosil hidrolasas presentan una gran plasticidad de sustratos, dentro de este grupo se describen las B-glucosidasas (EC.3.2.1.21). Estas últimas son un grupo heterogéneo de enzimas y su estudio actualmente presenta interés biotecnológico, por ejemplo en la industria vitivinícola y la citrícola. Shewanell sp. G5 fue aislada del intestino de Munida subrrugosa a partir del canal de Beagle (Argentina), y seleccionada como productora de dos B-glucosidasas frío activas, las cuales son codificadas por los genes bgl-A y bgl. Ambas enzimas fueron clasificadas dentro de las familias 1 y 3 de las glicosil hidrolasas, respectivamente. El objetivo del presente estudio fue optimizar las condiciones de crecimiento por qPCR de Shewanella sp. G5, par aobtener incrementos en los niveles de expresión de la enzimas en estudio. Shewanella sp. Se cultivó en diferentes condiciones: medio de cultivos (LBn y MMB), temperaturas (10 y 30ºC), y fuentes de carbono (celobiosa y glucosa). Los genes bgl-A y bgl y gyrB fueron cuantificados y normalizados mediante el método 2expDDCt. La actividad enzimática fue cuantificada mediante el sustrato p-nitro-fenil-B-glucopiranosido a partir de los extractos obtenidos de las diferentes condiciones de crecimiento. Los valores de 2expDDCt determinados para la expresión relativa de ambos genes (bgl-A y bgl) fueron 13, 14, 27 y 15, 19, 30 respectivamente en medio MMB incubado a 30 ºC, utilizando celobiosa como fuente de carbono. Asimismo la actividad de expresión de las B-glucosidasas en estudio presentó un incremento de 63% cuando se utilizó el medio MMB con celobiosa a 30ºC. La determinación de las condiciones de crecimiento permitió establecer los niveles óptimos de expresión de los genes bgl-A y bgl.