Diseño y formulación de medio de cultivo que simula fluido vaginal bovino (MSFVB). Adaptación, crecimiento y propiedades de Bacterias lácticas autóctonas benéficas (BLAB).

NADER-MACIAS MEF; MIRANDA MH

Cordoba

Congreso; LII REUNION ANUAL y PRIMER CONGRESO VIRTUAL DE LA ASOCIACION ARGENTINA DE FARMACOLOGÍA EXPERIMENTAL; 2020

Asociación Argentina de Farmacología Experimental

La aplicación de una fórmula veterinaria probiótica en vagina establece contacto con el fluido del tracto, ambiente en que las bacterias se adaptan, permanecen y sobreviven para reestablecer el equilibrio ecológico de la mucosa. El diseño de productos probióticos requiere que las BLAB resistan condiciones in vitro comparables a las del tracto en que se aplicarán, y continúen expresando sus propiedades benéficas (PB). Para ello se formuló un medio de cultivo similar al fluido vaginal bovino, diseñado con ingredientes de secreciones vaginales, para evaluar resistencia, viabilidad y propiedades benéficas de BLAB durante las fases foliculares (FF) y luteales (FL) del ciclo reproductivo. El medio contiene (mg/100ml): fructosa, 0.5; glucosa, 7; albúmina, 130; mucina, 6; caseína, 30 (FF) y 20 (FL); NaCl, 500; KCl, 150; KHPO4, 1,5; CaCl2, 10; Na2HPO4, 170 y Tween 80 0,1; pH 7.6 (FF) y 6.5 (FL). 11 BLAB de mucosas bovinas con PB se inocularon al 4% (MRS caldo como control), y se incubaron 32 h a 37°C, determinando número de UFC/ml, pH y propiedades probióticas. En MSFVB FL crecieron todas las BLAB, con mayor crecimiento a las 6 h, e incrementos de 1.00x106 a 1.00x108 ufc/ml hasta las 32 h. CRL1702 incrementó de 3.00x106 a 6.00x108 ufc/ml y se mantuvo hasta el final del ensayo, mientras CRL1696 fue el que menos creció. En FF, todas las BLAB crecieron de manera diferente. CRL1702 y CRL1695 de 1.50x106 a 1.00x1010 a las 24 h, mientras las restantes solo incrementaron 2 U.log. CRL1461 y CRL1696 crecieron a menores niveles. Todas las BLAB disminuyeron el pH en los medios ensayados, y las cepas con mayor descenso de pH fueron CRL1831, CRL1833 y CRL 1421 (pH=3,26; 3,35 y 3,46 y 3,40; 3,56 y 3,66 a las 24 h, respectivamente) tanto en MSFVB FL y FF. Todas las BLAB cultivadas en MSFVB mantuvieron las PB por las que se seleccionaron. CRL1412, CRL1421, CRL1655 y CRL1831 mantuvieron la producción de H2O2. La auto-agregación de CRL1693 en MSFVB FF y FL fue 60% y 85%, respectivamente, mientras CRL 1461 la incrementó (63%) en MSFVB FF, al comparar con la inicial (51%). CRL1693 continuó inhibiendo a S. aureus. Las tres cepas EPS+ (CRL1412, CRL1831 y CRL1833) produjeron exopolisacáridos y 1833 incrementó su hidrofobicidad (91%) en MSFVB.Los resultados obtenidos muestran que las cepas ensayadas se conservan viables y mantienen las PB en un medio que simula el tracto en que se aplicarán, y pueden incluirse en el diseño de fórmulas probióticas veterinarias de aplicación vaginal.