CERELA   05438
CENTRO DE REFERENCIA PARA LACTOBACILOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
CARACTERIZACIÓN DE UNA SUSTANCIA ANTIMICROBIANA PRODUCIDA POR Lactococcus lactis subsp lactis CRL 1655, PARA SU INCLUSION POTENCIAL EN UN PRODUCTO PROBIOTICO VETERINARIO
Autor/es:
ESPECHE, MARÍA CAROLINA; SESMA, FERNADO; NADER-MACÍAS, MARÍA ELENA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; Segundo Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos CLAMME 2009; 2009
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
CARACTERIZACIÓN DE UNA SUSTANCIA ANTIMICROBIANA PRODUCIDA POR Lactococcus lactis subsp lactis CRL 1655, PARA SU INCLUSION POTENCIAL EN UN PRODUCTO PROBIOTICO VETERINARIO Espeche MC, Sesma F, Nader-Macías ME. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA-CONICET). Chacabuco 145, S. M. de Tucumán T400ILC, Argentina. fnader@cerela.org.ar En los últimos años, se detecta un incremento de productos probióticos en el área veterinaria, destinados principalmente a la prevención de infecciones del tracto gastrointestinal en bovinos, ovinos, porcinos y aves de corral. Sin embargo, no existe actualmente en el mercado farmacéutico un producto probiótico para la prevención de mastitis  bovina (MB), que ocasiona grandes pérdidas económicas en el rodeo lechero. La terapia antibiótica que se aplica es la responsable del incremento de la resistencia microbiana y de la presencia de residuos antibióticos en la leche, por lo que el diseño de un producto aplicable como terapia constituiría una alternativa válida para esta afección. En trabajos previos, se han aislado y caracterizado los microorganismos presentes en glándula mamaria sana y con MB y se han seleccionado cepas productoras de bacteriocinas. El objetivo del presente trabajo es la caracterización de la sustancia antimicrobiana producida por Lactococcus lactis subsp lactis CRL1655 (aislada de leche de un cuarto mamario sano) para evaluar su potencial inclusión en el diseño de un producto probiótico de aplicación veterinaria para la prevención y/o terapia de mastitis bovina. Los microorganismos crecieron en LAPTg caldo, y los sobrenadantes se obtuvieron por centrifugación y posterior filtración por membranas (0.22µ). La producción de sustancias antimicrobianas se evaluó por el método de difusión en placa frente a 9 cepas patógenas de mastitis y a otras bacterias Gram (+), empleando el sobrenadante libre de células neutralizado y tratado con catalasa y con proteasas. Se realizaron ensayos de inhibición cruzada frente a tres cepas bacteriocinogénicas productoras con la misma metodología. Para la caracterización genética de la sustancia antimicrobiana se aisló el ADN de la bacteria empleando la técnica de Pospiech y Neumann y se realizaron reacciones de PCR con cebadores que amplifican los genes lantibióticos lanB y lanC y otros que amplifican el gen estructural de nisina. Los productos de PCR fueron purificados y secuenciados y las secuencias obtenidas analizadas usando algoritmos BLAST del NCBI (National Center of Biotechnology Information). El sobrenadante de cultivo libre de células de L. lactis CRL1655, neutralizado y tratado con catalasa mostró ser efectivo frente a los principales agentes causales de MB y sensible al tratamiento con proteasas. Las pruebas de inhibición cruzada indicaron que las sustancia de naturaleza peptídica producida por L. lactis CRL1655 es diferente a las de las otras cepas bacteriocinogénicas utilizadas. Las secuencias obtenidas fueron idénticas al gen estructural de Lactococcus lactis que codifica para nisina Z. Los resultados obtenidos indican que L. lactis CRL 1655, cepa autóctona de glándula mamaria bovina, inhibe a los principales agentes etiológicos de MB por producción de nisina Z. Este microorganismo, y/o su bacteriocina se podrá emplear para el diseño de un producto probiótico, individualmente, o combinada con otras cepas benéficas, para la prevención de MB.