RESISTENCIA AL ESTRÉS OSMÓTICO DE BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS VAGINALES BENÉFICAS (BALVB) PARA SU INCLUSIÓN EN FORMULACIONES FARMACÉUTICAS.

A. MARCHESI; J. A. SILVA; M. E. F. NADER-MACÍAS

Buenos Aires

Congreso; XIII JORNADAS DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA INDUSTRIAL (JorFyBi-2017); 2017

Asociación Argentina de Farmacia y Bioquímica Industrial (SAFYBI)

Introducción. La microbiota del tracto vaginal sano se caracteriza por la predominancia de microorganismos del género Lactobacillus que cumplen diferentes funciones fisiológicas dirigidas a mantener el equilibrio ecológico, prevenir infecciones y proteger la salud del tracto. Sin embargo, diferentes factores exógenos (actividad sexual, métodos anticonceptivos, uso de duchas vaginales y medicación) y endógenos (ciclo menstrual, pre o post menopausia, embarazo) pueden desequilibrar el ecosistema y favorecer las infecciones del Tracto Urogenital (TUG). Por ello, la prevención y/o terapia con BALVB constituyen una alternativa adecuada y novedosa para reconstituir la microbiota autóctona y disminuir infecciones del TUG y reducir el uso de antimicrobianos que producen efectos adversos y diseminación de resistencia antimicrobiana. Previamente nuestro grupo de trabajo ha aislado, identificado y seleccionado lactobacilos de vagina de mujeres sanas para avanzar en el diseño de formulaciones probióticas conteniendo BALVB. Asimismo, se han evaluado diferentes características, definiendo las cepas que expresan las mejores propiedades benéficas. El diseño de formulaciones farmacéuticas y cosméticas probióticas con BALVB requiere que los microorganismos permanezcan viables y en alto número en la formula final, en la que generalmente la actividad de agua (aw) está muy disminuida. Dado que los cambios en la osmolaridad del medio podrían comprometer las funciones fisiológicas, la viabilidad y expresión de características benéficas de los microorganismos, es necesario evaluar su resistencia al estrés osmótico. El objetivo del trabajo fue realizar un relevamiento de la resistencia al estrés osmótico de BALVB para su posterior inclusión en el diseño de formulaciones farmacéuticas. Materiales y métodos. En treinta cepas de BALVB se estudió la resistencia al estrés osmótico inoculándolas en MRS caldo con diferentes concentraciones de NaCl: 1%; 2%; 4%; 6%; 8% (p/v) cuyas equivalencias en aw es: 0,995; 0,991; 0,977; 0,964; 0,951, respectivamente, empleando MRS caldo como control. Se ensayaron diferentes cepas de las siguientes especies: Lactobacillus reuteri (3 cepas), L. gasseri (12), L. rhamnosus (4), L. salivarius (2), L. johnsonii (1), L. paracasei (2) y L. delbrueckii (6) evaluando su crecimiento en policubetas de poliestireno (lector de microplacas Versamax-microplate reader a una DO560nm). La suspensión de BALVB del tercer subcultivo en MRS se lavó dos veces con solución buffer (PBS pH= 6.5) y se inoculó al 2% en las placas conteniendo el medio de cultivo con diferentes concentraciones de sal, y se incubaron a 37ºC en condiciones de microaerofilia durante 24-36 hs, en que se cuantificó el crecimiento y sus parámetros. Resultados y conclusiones: La mayoría de las cepas crecen a concentraciones de aw: 0,995 (1% NaCl) con patrones de crecimiento y velocidades similares al control, mientras que las cepas de L. salivarius CRL 1296, L. paracasei CRL 1512; L. rhamnosus CRL 1332; L. reuteri CRL 1327; L. delbrueckii CRL 1313 y L. gasseri CRL 1509 resisten y crecen a valores de aw: 0,997 (4 % NaCl). La resistencia a condiciones osmóticas extremas facilitaría la posterior sobrevida de las BALVB a los procesos de elaboración de fórmulas de aplicación vaginal de baja aw, condiciones en las que deben mantenerse viables y expresas sus propiedades probióticas. Esta resistencia es cepa específica, y no está ligada al grupo metabólico al que pertenecen, ya que se evidencia tanto en especies homofermentativas obligadas, heterofermentativas facultativas y heterofermentativas obligadas.