Sensibilidad de heteropolisacáridos de bacterias lácticas a la microtécnica de periodato-reactivo de Schiff

MARTOS, GLADYS IRMA; GEREZ, CARLA LUCIANA; LOBO, RENÉ EMANUEL; TORINO, MARÍA INÉS

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano y Argentino de Microbiología; 2016

AAM-SAMIGE

Ciertas bacterias lácticas producen polímeros de azúcares extracelulares o exopolisacáridos (EPS) que pueden clasificarse en homopolisacáridos y heteropolisacáridos (HePS), según su contenido de uno o más azúcares diferentes. Existen diferentes métodos para cuantificar HePS; todos ellos implican su aislamiento y purificación, resultando en procedimientos prolongados, costosos, poco reproducibles y generador de grandes volúmenes de desechos químicos. El método colorimétrico de ácido periódico reactivo de Schiff (PAS) es un método estandarizado de elevada sensibilidad, especificidad y reproducibilidad frente a distintos tipos de carbohidratos. Este trabajo pretende evaluar la aplicabilidad de la microtécnica colorimétrica de PAS en HePS purificados, producidos por Streptococcusthermophilus en leche, a fin de establecer las bases para cuantificar directamente estos polímeros en matrices lácteas, sin proceder a su aislamiento.Seis cepas de Str. thermophilus (CRL419, CRL638, CRL804, CRL810, CRL815 y CRL1190) se cultivaron en leche (10%) durante 16 h a 37ºC. Al final de la fermentación se purificaron los HePS producidos y se determinó: crecimiento (recuento en placa), acidificación (pH, TTA) y azúcares residuales (HPLC). La cuantificación de los HePS purificados se realizó por método gravimétrico (peso seco, mg/L) mientras que su sensibilidad al PAS (A550 nm¸ kit Biopurdiagnostics) se evaluó en soluciones comprendidas entre 0,0 y 1,0 mg/mL. La técnica de PAS también se aplicó a lactosa, monosacáridos constituyentes de los HePS en estudio (glucosa, galactosa, ramnosa, glucosamina y galactosamina) y a HePS comerciales (goma guar, garrofin, carragenina).Todas las cepas crecieron (2.5-3 unidades log), acidificaron (pH final 4.3-4.4) y consumieron azúcares (lactosa y glucosa), de manera similar. Solo CRL419 utilizó galactosa. La producción de HePS fue poco variable, encontrándose niveles de producción menores a 75 mg/L en un grupo de cepas (CRL638, CRL804, CRL810 y CRL1190) y cantidades mayores a 88 mg/L en CRL419 y CRL815. Al evaluar la aplicabilidad del método colorimétrico de PAS a HePS purificados y comerciales, se obtuvieron curvas patrones que evidenciaron una relación lineal positiva con elevados coeficientes de regresión (R2 ? 0.99) y valores de pendiente comprendidos entre 0.57 y 0.91, excepto para carragenina que presentó reacción negativa. Por otro lado, se observó una escasa respuesta de absorbancia en lactosa y monosacáridos constituyentes de los HePS. Es decir, la respuesta de los HePS al método PAS no estuvo relacionada con el PM ni con la composición monomérica. Como conclusión, la microtécnica colorimétrica de PAS permite obtener curvas patrones de HePS purificados con alto grado de reproducibilidad en el rango de concentraciones evaluadas. Tanto lactosa como sus monómeros (glucosa y galactosa) presentan baja absorbancia al PAS en relación a los HePS por lo que no ocasionarían interferencia en las concentraciones ensayadas.