DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO KILLER DE LEVADURAS VÍNICAS

LUCÍA M. MENDOZA; MARÍA C. MANCA DE NADRA; MARTA E. FARÍAS

Tucumán, Argentina

Jornada; XXIV Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán.; 2007

En los primeros estadios de la fermentación alcohólica existe un predominio de levaduras no-Saccharomyces pertenecientes principalmente a los géneros Kloeckera /Hanseniaspora y Candida. Posteriormente estas levaduras son reemplazadas por Saccharomyces cerevisiae que domina y completa la fermentación. Sin embargo, recientes estudios indican que cepas de levaduras no-Saccharomyces sobreviven períodos más prolongados, contribuyendo a las características organolépticas del producto terminado. De esta manera, las interacciones que se establezcan entre las diferentes especies deben ser consideradas. En nuestro laboratorio determinamos que las cepas vínicas de K. apiculata mc1 y S. cerevisiae mc2 disminuyen su población celular en cultivo mixto, en relación a sus respectivos cultivos puros. Existen diferentes compuestos producidos por las levaduras que pueden inhibir a otras especies o cepas de levaduras. Un mecanismo inhibitorio que puede tener lugar en las fermentaciones vínicas es la actividad killer de las levaduras. Estas levaduras poseen la capacidad de sintetizar y secretar una toxina proteica que es letal para cepas de levaduras sensibles. Las cepas productoras de toxinas son inmunes a sus propias toxinas pero pueden ser sensibles o resistentes a las producidas por otras cepas killer. El objetivo de este trabajo es caracterizar el fenotipo killer de 2 cepas vínicas, Kloeckera apiculata mc1y Saccharomyces cerevisiae mc2, y determinar su implicancia en el comportamiento cinético de ambas levaduras en condiciones de co-cultivo. El fenotipo killer se ensaya en medio YPD-MB (extracto de levadura 10g/l, peptona 20g/l, glucosa 20g/l, agar 20g/l, azul de metileno 0,03 g/l y buffer citrato fosfato 0,1 M) a diferentes valores de pH (3,5; 4,5 y 5). La sensibilidad de K. apiculata y S. cerevisiae se evalúa frente a cepas killer de referencia: S. cerevisiae YAT 679 (tipo K1), S. cerevisiae NCYC 738 (tipo K2), C. glabrata NCYC 388 (tipo K4), Kluyveromyces drosophilarum NCYC 575 (tipo K10). Para determinar la capacidad de K. apiculata y S. cerevisiae de producir toxinas killer, se siembran ambas levaduras por estría sobre un césped de una cepa sensible de colección, S. cerevisiae P351. Después de 3-5 días de incubación a 18ºC, los resultados se expresan como: killer sensible, cuando alrededor de la estría se observa un halo de inhibición delimitado por un borde azul de células muertas y killer resistente, cuando no se observa halo de inhibición.   K. apiculata mc1 presenta resistencia a las cepas killer de referencia y no produce toxinas (fenotipo neutro). S. cerevisiae mc2 no produce toxina y presenta un fenotipo killer sensible a todas las cepas de colección ensayadas. Cuando se ensaya la sensibilidad de K. apiculata frente a S. cerevisiae, se observa un halo sin borde azul, indicando inhibición de la levadura apiculada sin muerte celular. La variación del pH del medio no produce modificaciones en las actividades  killer determinadas. Los fenotipos killer de K. apiculata mc1 y S. cerevisiae mc2 y la ausencia de muerte celular observada en el ensayo de sensibilidad entre ambos microorganismos, nos permiten concluir que la menor densidad celular alcanzada por las levaduras vínicas en condiciones de co-cultivo no es debida a la producción de toxina killer, indicando que otro metabolito seria responsable de la inhibición del crecimiento.