Clonagem e expressão de 3 peptídeos antimicrobianos produzidos por Lactobacillus sakei subsp. sakei 2a em sistema heterólogo

KRUGER, M. F.; LIMA, K. G. C.; BARBOSA, M.S; SALVUCCI, E.; SESMA, F; FRANCO, B. D. G. M

Brasília - DF - Brasil

Congreso; congresso Brasileiro de Microbiologia; 2007

Sociedad Brasileira de Microbiologia

Bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos ativos contra diversos patógenos de interesse em alimentos, principalmente Listeria monocytogenes. Lactobacillus sakei subsp. sakei 2a produz a bacteriocina sakacina 2a e, pelo menos, outros oito peptídeos com comprovada atividade antimicrobiana. Entretanto, a produção destes peptídeos pela cepa original se dá em pequena escala, dificultando a sua utilização. Uma das estratégias para aumentar a sua produção é a clonagem dos genes envolvidos na sua síntese. Este trabalho objetivou clonar os genes responsáveis pela produção da sakacina 2a, uma proteína ribossomal e um peptídeo tipo histona em E. coli, avaliando a expressão e produção dos antimicrobianos pela cepa heteróloga. Inicialmente foi feita a extração direta do DNA para investigar os genes responsáveis pela produção dos antimicrobianos. Os genes de interesse foram amplificados por PCR utilizando-se primers específicos. Os fragmentos amplificados foram extraídos, clonados em plasmídeos vetores tipo TOPO 2.1 (GE- Healthcare) e introduzidos em células competentes E. coli DH10ß. Os resultados demonstraram que houve a inserção correta das sequências dos genes e de suas orientações, porém não houve a expressão de nenhum dos peptídeos no sobrenadante das culturas. Experimentos com outras cepas de E. coli competentes e outros vetores de expressão estão sendo realizados para a indução da expressão dos peptídeos antimicrobianos em sistema heterólogo.