Clonado y determinación parcial de la secuencia del gen hsb de Lactobacillus reuteri CRL 1098

BUSTOS, ANA YANINA; RAYA, RAUL; TARANTO, MARÍA PÍA

San Miguel de Tucuman, Argentina

Jornada; . Jornadas Primeras Jornadas de Jóvenes Investigadores UNT-AUGM; 2007

Introducción. Los ácidos biliares conjugados, componentes mayoritarios de la bilis, pueden ser hidrolizados por la  enzima Hidrolasa de Sales Biliares (HSB), liberando el ácido deconjugado y taurina o glicina. La resistencia a bilis ha sido relacionada con la actividad HSB, por lo cual podría incluirse esta capacidad como criterio de selección de cepas lácticas probióticas. El objetivo de este trabajo fue identificar y caracterizar los determinantes genéticos de la HSB de L. reuteri CRL 1098, microorganismo probiótico cuya capacidad de reducir el colesterol sérico está estrechamente relacionada con la actividad hidrolasa.   Materiales y métodos. A partir de los dominios conservados presentes en proteínas HSB microbianas, se diseñaron cebadores degenerados, los que se utilizaron para amplificar el gen hsb de la cepa CRL1098. El amplicón fue clonado y secuenciado.   Resultados. Se obtuvo un fragmento esperado de 630 pb, que fue clonado en el plásmido pBScript II SK(-) y propagado en E. coli DH10b. La secuencia del mismo se determinó utilizando los cebadores T3 y T7.   Discusión y conclusión. La secuencia obtenida presentó un 98% de identidad con la HSB de L reuteri 100-23. La obtención de esta secuencia parcial permitirá realizar estudios complementarios de funcionalidad de la enzima.