Caracterización de la cofloculación de levaduras aisladas de vino

SOSA, O.A.; SANTILLÁN, E.N..; MANCA DE NADRA, M. C.; FARÍAS, M.E.

Tucumán, Argetnina

Jornada; V Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino; 2007

La floculación de levaduras es un fenómeno de agregación asexual que conduce a la formación de asociaciones multicelulares estables. La teoría lectínica postula que la floculación resulta de la interacción entre un receptor glicoproteico y un ligando glucídico, localizados sobre la pared celular de las levaduras. Kloeckera apiculata mc1, levadura aislada de vino argentino, expresa fenotipo autofloculante con interacción lectina-galactosa estabilizada por Ca2+. Este microorganismo es capaz de  agregar con una cepa no floculante de Saccharomyces cerevisiae, fenómeno conocido como cofloculación. En este trabajo se determina el efecto de proteasas sobre la cofloculación de K. apiculata mc1 y S. cerevisiae mc2. Los cultivos de levaduras se cultivan en medio YMPG y se incuban a 28°C. Las células se resuspenden en tampón Tris-HCl adicionado de 1 mg/ml de tripsina, quimotripsina o proteinasa K; se incuban 2 h a 28ºC; se lavan y se resuspenden en tampón refloculante. El porcentaje de floculación se determina por recuento celular diferencial en medio YPMG en ausencia o presencia de cicloheximida. La superficie de las células que cofloculan se examina por microscopía electrónica de barrido. El fenotipo cofloculante revierte completamente por el tratamiento con proteinasa K y quimotripsina después de 2 h de incubación. Tripsina presenta un efecto más gradual. Resultados similares se obtienen después de preincubar las células autofloculantes con proteinasas. Las microfotografías de barrido muestran que el tratamiento enzimático produce la dispersión de los fóculos mixtos, probablemente por la desaparición de un mucus homogéneo presente en la superficie de las células cofloculantes. Los resultados indican que en el mecanismo de cofloculación entre K. apiculata mc1 y S. cerevisiae mc2 están involucradas proteínas de la pared celular de los microorganismos que interactúan.