Expresión de Pppa de neumococos en Lactococcus lactis induce una respuesta protectiva en un modelo experimental de infección diseminada en ratones.

M. MEDINA, J. VILLENA, E. VINTIÑI, E.M. HEBERT, S. ALVAREZ, R.R. RAYA

San Miguel de Tucumán

Simposio; Simposio Internacional de Bacterias Lácticas-Primer encuentro Red BAL Argentina.; 2006

CERELA (CONICET)

Streptococcus pneumoniae puede causar otitis media, meningitis y neumonía. El desarrollo de vacunas vivas, usando como vector a Lactococcus lactis, una bacteria láctica de grado alimentario, es una alternativa válida para la protección de la mucosa respiratoria contra las infecciones causadas por S. pneumoniae. En el presente trabajo se ha logrado clonar y expresar a nivel de pared celular de Lactococcus lactis NZ9000, los determinantes genéticos de una proteína de superficie (PppA) de neumococos. La PppA es un inmunógeno de mucosas de bajo peso molecular, antigénicamente conservado en varios serotipos, entre ellos el serotipo 14, principal causante de enfermedades neumocócicas en nuestro país. El gen pppA fue subclonado en los sitios NcoI y SalI del plásmido pET28c y el plásmido recombinante introducido por transformación en Escherichia coli BL21(D3). Luego de inducir las células recombinantes durante 2 horas con 1 mM de isopropiltiogalactósido (IPTG), la expresión de la proteína recombinante esperada, de aproximadamente 21 kDa, fue confirmada mediante electroforesis en geles SDS-PAGE. La proteína PppA fue también subclonada como un fragmento SalI-EcoRV en el plásmido vector pVE5547. La expresión de la proteína híbrida de 354 amino ácidos, con la secuencia señal Ups45 en su extremo amino y la secuencia de anclado a pared celular de la proteína M6 en su extremo carboxilo, fue inducida con nisina. La cepa recombinante de L. lactis fue utilizada en experimentos de inmunizaciones preventivas secuenciales de ratones albino-suizos, susceptibles a la infección neumocóccica y desafiados con 108 células de S. pneumoniae T 14/ratón. La sobrevida de los animales fue monitoreada durante 21 días y los resultados fueron analizados por el test U de Mann-Whitney. Los tiempos medios de sobrevida para los animales adultos que recibieron PBS o L. lactis PppA- fueron menores a 4,5 días y todos los animales murieron a los 7 días post-infección. A su vez, el grupo de ratones jóvenes mostró un menor tiempo medio de sobrevida y los animales murieron a los 3,5 días. Sin embargo, los ratones inmunizados  con L. lactis PppA+ permanecieron vivos durante el tiempo evaluado (21 días). Nuestros resultados sugieren que la cepa recombinante L. lactis PppA+ tiene el potencial para ser utilizada como una vacuna viva.