Caracterización de una variante de la cepa lisogénica Lactobacillus helveticus CRL1179 curada de plásmido.

M.F. GORRITI, J.C. VILLENA, M.B. ESPECHE, M. DYEN, E.M. HÉBERT, Y R.R. RAYA

San Miguel de Tucumán

Simposio; Simposio Internacional de Bacterias Lácticas-Primer encuentro Red BAL Argentina.; 2006

CERELA (CONICET)

Lactobacillus helveticus es una bacteria láctica termófila utilizada para la elaboración de quesos de pasta cocida. A pesar de su gran importancia económica, no se conoce aún un método generalizado para transformar genéticamente a este microorganismo. En el presente estudio, y con el objeto de optimizar un protocolo de electroporación para L. helveticus, se seleccionó como cepa modelo a L. helveticus CRL 1179, un microorganismo que presenta un fenotipo Fmc-, ya que coagula leche descremada reconstituída al 10% en un período mayor a las 16 h. Se determinó que CRL 1179 es un lisógeno que posee dos plásmidos (de 7 y 10 kb). El fago temperado presente en CRL 1179, denominado φLhR3, puede ser inducido a lisis con mitomicina C (0.2 µg/ml). Se identificaron células sensibles a φLhR3 cuyo crecimiento fue inhibido por el lisado, aunque no se observaron placas de lisis. A su vez, se aisló y caracterizó una variante libre del plásmido de 7 kb de CRL 1179, denominada cepa C4. La cepa C4  posee, además del carácter Fmc-, un fenotipo de aglutinación marcado y una fase lag de crecimiento más prolongada (2-4 h) que la cepa original (CRL 1179). En ambas cepas el fenotipo Fmc- pudo ser atribuido a una deficiencia en la biosíntesis de bases púricas, más que a una deficiencia en la actividad proteinasa. Todos los intentos de electroporar CRL 1179 y C4 con los plásmidos pGK12 y pSA3 fueron insatisfactorios.