Purification and characterization of a bacteriocin produced by Lactococcus lactis CRL291

M. RIVAS,; E. SALVUCCI; F. SESMA

Tucuman, Argentina

Simposio; II Simposio Internacional de Bacterias Lácticas; 2006

Centro de Referencia para Lactobacilos

PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE BACTERIOCINA PRODUCIDA POR Lactococcus lactis CRL291.   Rivas M., Salvucci E, Sesma F. CERELA-CONICET Chacabuco 145 - San Miguel de Tucumán marisarivas17@hotmail.com.ar     Las bacteriocinas son péptidos antimicrobianos de síntesis ribosomal con o sin modificaciones postraduccionales producida por una bacteria, que presenta actividad inhibitoria frente a otros microorganismos. Los organismos productores son generalmente  inmunes a su propia bacteriocina, una propiedad que es mediada por proteínas de inmunidad específicas. Lactococcus lactis CRL 291 es una cepa bacteriocinogénica aislada a partir de un queso regional producido en Tafí del Valle. Presenta actividad antimicrobiana contra géneros de enterococos y lactobacilos. Se planteó una estrategia de purificación y caracterización de la bacteriocina mediante precipitación con sulfato de amonio a partir de sobrenadante libre de células en medio químicamente definido (Bacto B12 Vitamin assay médium) y posterior pasaje por columnas de extracción en fase sólida (SPE) C18, utilizando como eluyente distintas concentraciones de isopropanol. Las fracciones activas fueron concentradas y resuspendidas en agua destilada. Se evaluó la presencia del péptido en geles de SDS-PAGE, revelándose con tinción con SYPRO-ruby y revelado biológico. El extracto obtenido presentó actividad contra Lactobacillus plantarum CRL691 y Lactobacillus helveticus CRL1176. No presentó actividad contra Listeria. La fracción activa presenta un péptido con un peso molecular aproximado de 10 KDa. Por otro lado se realizaron estudios tendientes a identificar el carácter plasmídico o cromosómico del cluster de biosintesis de la bacteriocina. Se estudio el perfil plasmídico  y se realizaron diferentes estrategias de curado de plásmido y cotransformación. No se obtuvieron cepas curadas sin capacidad inhibitoria sugiriéndose la localización cromosómica del cluster biosintético o plasmídica ligado a genes necesarios para la viabilidad.