Peptides derived from the NH2-terminal of the subclass Iia bacteriocin enterocin CRL35 show antimicrobial activity

SALVUCCI, E.; SESMA, F

Tucuman, Argentina

Simposio; II International Symposium of Lactic Acid Bacteria; 2006

Centro de Referencia para Lactobacilos

PÉPTIDOS DERIVADOS DEL EXTREMO NH2-TERMINAL DE ENTEROCINA CRL35 CON PROPIEDADES ANTIMICROBIANAS. E. Salvucci, F. Sesma. Centro de Referencia para Lactobacilos (CERELA)-CONICET. Chacabuco 145. 4000. San Miguel de Tucumán, Tucumán, Argentina. esalvucci@cerela.org.ar   Las bacteriocinas son un diverso grupo de péptidos o proteínas de síntesis ribosomal con actividad antimicrobiana producidos por un gran número de especies bacterianas. Aquellas producidas por bacterias acidolácticas tienen especial interés por su carácter de categoría alimenticia y su aplicabilidad en la industria como biopreservantes. Las bacteriocinas subclase IIa se caracterizan por su actividad antilisteria; presentan un consenso YGNGVxCxxxxC en el extremo amino terminal y un dominio C-terminal más diverso que permite clasificar a esta subclase en tres subgrupos. Es comúnmente aceptado que ejercen actividad bactericida permeabilizando la membrana de la célula. Con el fin de estudiar la estructura-función de bacteriocinas tipo pediocina examinamos la actividad inhibitoria de péptidos sintéticos cortos derivados de la secuencia del N-terminal de enterocina CRL35, de enterocina A y de divercina V41. Se evaluó además la actividad antimicrobiana en medios complejos y químicamente definidos. La actividad inhibitoria fue realizada usando el método de difusión en agar. Los medios utilizados fueron: BHI, LAPTg, HTM, Vitamin assay medium Bacto B12 (DIFCO, suplementado con tripteína, peptona o extracto de levadura). CIMs (concentraciones inhibitorias mínimas) se realizaron mediante diluciones sucesivas de los antimicrobianos en la placa de agar o siguiendo el crecimiento en DO560nm. Enterocina CRL35 y péptidos truncados fueron sintetizados químicamente, mientras que divercina V41 y enterocin A fueron purificadas a partir de sobrenadantes libre de células de las cepas productoras. Ensayos de permeabilización de la membrana citoplásmica fueron determinados usando la sonda fluorescente 3,5-dipropylthiadicarbocyanine (diSC3-5). Los péptidos derivados de NH2-terminal de enterocina CRL35 de 15 y 16-mer fueron activos contra L. innocua 7 y L. monocytogenes con una CIM de 10 µM y 50 µM, respectivamente. Estos péptidos disipan el potencial de la membrana de células sensibles. La mayor actividad se observó en medios químicamente definidos o mínimos, sugiriendo que la actividad se podría inhibir por algunos componentes de los medios complejos. Estos resultados confirman la importancia de usar medio químicamente definido para estudiar el espectro de la acción y el papel ecológico de las bacteriocinas. Es interesante aclarar el mecanismo de la acción de estos péptidos que carecen del dominio anfifílico y mantiene actividad. El hecho de que los péptidos truncados demuestran un espectro de acción similar a las bacteriocinas parentales, sugiere que podrían mantener la especificidad incluso sin el dominio C-terminal.