Identificación genética de Lactobacillus potencialmente probióticos destinados a la prevención de metritis bovina

MARIA CLAUDIA OTERO; MARIA LUISA CALLEGARI; LORENZO MORELLI,; MARIA ELENA NADER-MACIAS

Tafi del Valle. Tucuman

Jornada; XXIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Tucumán; 2006

Sociedad de Biologia de Tucumán

IDENTIFICACIÓN GENÉTICA DE Lactobacillus POTENCIALMENTE PROBIÓTICOS DESTINADOS A LA PREVENCIÓN DE METRITIS BOVINA.   Otero M. Claudia1, Callegari M. Luisa2 , Morelli Lorenzo2 and Nader-Macías M. Elena1* 1. Centro de Referencia para Lactobacilos-CONICET. Tucumán, Argentina. E-mail: fnader@cerela.org.ar. 2. Istituto di Microbiologia. Università Cattolica del Sacro Cuore. Piacenza, Italy.   Las  metritis bovinas y los tratamientos antibióticos que deben aplicarse durante el posparto causan efectos adversos en la salud de las hembras y en la calidad de la leche producida. Nuestro objetivo es la selección de Lactobacillus probióticos para la prevención de la colonización del tracto reproductor bovino por microorganismos potencialmente patógenos que causan metritis de posparto. En trabajos previos se aislaron Lactobacillus del tracto reproductor bovino. Los que fueron estudiados y seleccionados por sus potencialidades probióticas, tales como propiedades de adhesión e inhibición de microorganismos patógenos causantes de metritis bovina La identificación de las cepas de Lactobacillus por métodos convencionales basados en la determinación de las propiedades bioquímicas de los microorganismos presenta  limitaciones al momento de discriminar especies de un mismo grupo metabólico. Las técnicas basadas en biología molecular pueden resultar una alternativa rápida, económica y altamente discriminatoria para la identificación de bacterias ácido-lácticas.    El objetivo de este trabajo es la identificación genética de cepas de Lactobacillus aisladas del tracto reproductor bovino, aplicando el Análisis de restricción del amplificado del 16s rDNA (ARDRA). Se determinó el grupo metabólico al que pertenece cada microorganismo. Para ello se realizaron las pruebas de producción de CO2 a partir de glucosa, fermentación de ribosa y crecimiento en MRS-Vancomicina (12mg/ml). La extracción de ADN y su amplificación se realizaron empleando los reactivos de micro LYSIS y Mega Mix  (LABOGEN SRL) con los sebadores P0 y P6. Las enzimas de restricción empleadas fueron: Sau 3AI, Hinf I, Dra I y Hinc II. Los perfiles obtenidos se compararon con los patrones característicos para cada especie según el grupo metabólico. La mayoría de los microorganismos (20 de un total de 26) resultaron heterofermentativos obligados y sus perfiles coincidieron con el de L. fermentum. Solo un lactobacilo fue reconocido como heterofermentativo facultativo y se identificó como L. rhamnosus. En ambos casos los resultados coincidieron con aquellos obtenidos aplicando los ensayos de fermentación de azúcares. De los aislados pertenecientes al grupo de homofermentativos, cuatro se identificaron como L. gasseri, los cuales fueron clasificados como L. acidophilus por sus propiedades fenotípicas. Por lo que se puede concluir que el sistema ARDRA presenta buena resolución para el grupo acidophilus. Sin embargo uno de los perfiles de homofermentativos no se correspondió con ninguno de los patrones teóricos, esta cepa fue identificada como L. delbrueckii subsp. delbrueckii por su perfil de fermentación. El esquema ARDRA no dispone de patrones para esta especie.  La correcta identificación genética es un paso fundamental para la inclusión de cepas de Lactobacillus vaginales en un probiótico destinado a la prevención de metritis bovina.