Caracterización de una Bacteriocina Sintetizada por Enterococcus faecium Aislado de Miel

IBARGUREN, C.; APELLA , M. C.; AUDISIO, M. C.

Buenos Aires

Congreso; Tercer Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; 2006

División de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos de la Asociación Argentina de Microbiología

  Uno de los patógenos emergentes más preocupantes es Listeria monocytogenes, bacteria que se torna 300 veces más peligrosa en personas con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El objetivo de este trabajo fue la caracterización, purificación parcial y estudio del efecto sobre cepas de L. monocytogenes de una enterocina sintetizada por Enterococcus faecium. E. faecium Casa1 fue aislado de una muestra de miel. Se determinó la síntesis de bacteriocina y se procedió a la purificación parcial de dicho metabolito según la siguiente secuencia: precipitación con sulfato de amonio, filtración por gel y HPLC. La actividad antimicrobiana se estudió a través de la determinación del número de células viables por recuento en placa sobre diferentes cepas de L. monocytogenes, sensibles y clones espontáneamente resistentes (originados como colonias satélites en los halos de inhibición al analizar las bacteriocinas por el método de difusión en placa). La sustancia con actividad anti-Listeria fue sensible a la acción de las siguientes enzimas proteolíticas: tripsina, pepsina, α-quimotripsina y proteinasa K; indiferente al tratamiento con lipasas o amilasas; altamente resistente a la temperatura (121ºC durante 15 min) y estable a la conservación a 4º C. La secuencia de purificación aquí planteada permitió obtener fracciones, luego del análisis por HPLC, que conservaron la actividad antimicrobiana. El efecto anti-Listeria fue cepa dependiente. Las cepas de L. monocytogenes (01/01, 01/158, 00/288, 99/373, 00/270, 00-3/364, 01/198, 00/200, 01/200 y 99/360) fueron sensibles y dieron lugar a un halo nítido y limpio. La cepa L monocytogenes 99/287 presentó cierta resistencia que fue detectada por la presencia de colonias satélites en el halo de inhibición. Uno de los clones “espontáneamente” resistentes fue recuperado y usado nuevamente como cepa indicadora. Con el método de difusión en placa no se detectó inhibición. Sin embargo, sí se vio afectada la viabilidad de este clon resistente cuando creció en presencia de la cepa productora de la bacteriocina; ésta disminuyó de 1 x 109 ufc mL-1 a 1 x 106 ufc mL-1 luego de 5 h de cultivo. Existe información acerca de la emergencia de cepas de Listeria resistentes a nisina y a otras bacteriocinas de la clase II. Por ello, el contar con nuevas cepas productoras de bacteriocinas podría ser una buena estrategia para solucionar el problema de resistencia.   Uno de los patógenos emergentes más preocupantes es Listeria monocytogenes, bacteria que se torna 300 veces más peligrosa en personas con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA). El objetivo de este trabajo fue la caracterización, purificación parcial y estudio del efecto sobre cepas de L. monocytogenes de una enterocina sintetizada por Enterococcus faecium. E. faecium Casa1 fue aislado de una muestra de miel. Se determinó la síntesis de bacteriocina y se procedió a la purificación parcial de dicho metabolito según la siguiente secuencia: precipitación con sulfato de amonio, filtración por gel y HPLC. La actividad antimicrobiana se estudió a través de la determinación del número de células viables por recuento en placa sobre diferentes cepas de L. monocytogenes, sensibles y clones espontáneamente resistentes (originados como colonias satélites en los halos de inhibición al analizar las bacteriocinas por el método de difusión en placa). La sustancia con actividad anti-Listeria fue sensible a la acción de las siguientes enzimas proteolíticas: tripsina, pepsina, α-quimotripsina y proteinasa K; indiferente al tratamiento con lipasas o amilasas; altamente resistente a la temperatura (121ºC durante 15 min) y estable a la conservación a 4º C. La secuencia de purificación aquí planteada permitió obtener fracciones, luego del análisis por HPLC, que conservaron la actividad antimicrobiana. El efecto anti-Listeria fue cepa dependiente. Las cepas de L. monocytogenes (01/01, 01/158, 00/288, 99/373, 00/270, 00-3/364, 01/198, 00/200, 01/200 y 99/360) fueron sensibles y dieron lugar a un halo nítido y limpio. La cepa L monocytogenes 99/287 presentó cierta resistencia que fue detectada por la presencia de colonias satélites en el halo de inhibición. Uno de los clones “espontáneamente” resistentes fue recuperado y usado nuevamente como cepa indicadora. Con el método de difusión en placa no se detectó inhibición. Sin embargo, sí se vio afectada la viabilidad de este clon resistente cuando creció en presencia de la cepa productora de la bacteriocina; ésta disminuyó de 1 x 109 ufc mL-1 a 1 x 106 ufc mL-1 luego de 5 h de cultivo. Existe información acerca de la emergencia de cepas de Listeria resistentes a nisina y a otras bacteriocinas de la clase II. Por ello, el contar con nuevas cepas productoras de bacteriocinas podría ser una buena estrategia para solucionar el problema de resistencia.