Actividad anti-viral de un lactobacilo no-viable en co-cultivo de c¨¦lulas mononucleares de sangre perif¨¦rica humana y A549 estimuladas con el patr¨®n molecular asociado a pat¨®genos virales (Poly I:C)

MEDINA MARCELA; VINTIÑI ELISA

Vaquerias-Cordoba

Otro; Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Virologia; 2012

Asociacion Argentina de Microbiologia-Sociedad Argentina de Virologia

Introduccion: Trabajos previos demostraron que la administracion oral y nasal de bacterias lacticas (BL) fue capaz de aumentar la inmunidad contra patogenos respiratorios, principalmente bacterianos. El efecto inmunoestimulador de BL frente a frente a virus respiratorios fue menos estudiado. Las celulas epiteliales del tracto respiratorio representan la primera barrera contra con los patogenos respiratorios y participan en la defensa del huesped mediante la liberacion de citoquinas y quemoquinas. Por otro lado, las celulas mononucleares de sangre periferica (PBMC) como parte del sistema inmune, contribuyen activamente en los mecanismos de defensa frente a patogenos inhalados, existiendo una estrecha interaccion celulas epiteliales pulmonares- PBMC. Objetivos: 1-Evaluar la induccion de citoquinas y la estimulacion de celulas T en un modelo de co-cultivo PBMC-A549, empleando como estimulos: Lactobacillus casei muerto por calor (LcM) y el patron molecular asociado a patogenos virales Poly I:C (dsRNA), que mimetiza el efecto de la infeccion respiratoria por Virus Respiratorio Sincitial (VRS) en modelos in vivo. 2-Analizar el potencial efecto anti-viral de LcM en este modelo. Materiales y Metodos: Se empleo un modelo de co-cultivo de PBMC, purificadas de sangre periferica de donantes sanos y celulas A549, como modelo de celulas epiteliales. Los co-cultivos A549-PBMC fueron realizados en placas de 6 pocillos. Las mismas fueron estimuladas durante 24 h con: 1) LPS, 2) LcM (106 cel/ml), 3) Poly I:C (2 ug/ml), 4) LcM+Poly I:C y 5) LcM preventivo (3 horas) seguida de Poly I:C. Co-cultivos sin estimular fueron empleados como control (C). 1) En sobrenadantes de cultivo se evaluo: TNF-alpha, INF-alpha (IL-29), INF-gamma e IL-10 por ELISA,  2) En PBMC se evaluaron los marcadores CD3+ (LT totales), CD4+ (LThelper), CD8+(LT citotoxicos), CD25+ (activacion de LT) y CD56+ (NK), por citometria de flujo. Resultados: Los resultaron mas importantes mostraron que Poly I:C indujo elevados niveles de TNF-alpha, INF-alpha e INF-gamma en comparacion al control, mientras q los niveles de IL-10 solo fueron ligeramente superiores. La estimulacion de A549-PBMC con LcM durante 3 horas previa a la estimulaci¨on con Poly I:C (LcM (3h)+Poly I:C), indujo niveles elevados de las citoquinas pro-inflamatorias y de INF- ¦Ë antiviral, mientras que indujo una elevada produccion de IL-10 reguladora. Todos los est¨ªmulos incrementaron la activacion de LT CD3+CD4+, mientras que solo LcM+Poly I:C y LcM (3h)+Poly I:C indujeron mayor activacion de LT CD3+CD8+. Ademas, todos los estimulos indujeron una expansion de las celulas NK. Conclusiones: LcM(3h)+Poly I:C fue capaz de inducir un perfil balanceado de citoquinas pro-inflamatorias e IL-10 reguladora, fundamental para modular la respuesta inmune. Ademas, indujo activacion de cel. T CD8+ y expansion de NK que participan en la respuesta anti-viral. La actividad anti-viral de LcM en el modelo in vitro abriria una interesante alternativa para su empleo como inmunomodulador en las infecciones causadas por patogenos virales como VRS y otros en cuyo ciclo vital se incluye el dsRNA.