Inflamación Aguda: Optimización de un modelo pro-inflamatorio ?in vitro?

HARO, CECILIA; MÓNACO, MARÍA EUGENIA; MEDINA MARCELA; GRACIELA AGUERO

Horco Molle-Tucumán

Jornada; XXIX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2012

Asociación de Biología de Tucumán

La inflamación local y sistémica puede generar un ambiente protrombótico dirigido principalmente por el factor tisular. Un estímulo con lipopolisacárido bacteriano (LPS) puede inducir inflamación y activación de la hemostasia, simulando los cambios fisiopatológicos producidos durante el shock séptico. Objetivo. Poner a punto un modelo ?in vitro? de inflamación aguda empleando células mononucleares (CM) de ratón estimuladas con LPS..Las CM fueron obtenidas a partir de sangre periférica de ratones adultos sanos empleando un gradiente de densidad. Las mismas fueron lavadas, cultivadas en placas de 96 wells en una concentración de 1,5 x 105 en RPMI suplementado con antibióticos y estimuladas con LPS en diferentes concentraciones: 1µg/ml (LPS1), 5 µg/ml (LPS5) y 10 µg/ml (LPS10). Como control se emplearon CM sin estimular (C). A las 12, 24 y 36 h post LPS se evaluó: 1) actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH) en sobrenadante, 2) viabilidad celular mediante Tripan Blue y 3) niveles de expresión de TNF-α. Resultados. Las diferentes concentraciones de LPS probadas incrementaron los niveles de LDH (LDH12hpLPS C=84,6±15,1U/L; LPS1=107,1±23; LPS5=310,6±24; LPS10=205,9±23), disminuyeron la viabilidad celular y aumentaron los niveles de expresión de TNF-α. Los resultados obtenidos evidenciaron que todas las concentraciones de LPS ensayadas promovieron la generación de un ambiente inflamatorio. Sin embargo, la dosis de 5 ug/ml fue la que mejor manifestó los cambios progresivos en los parámetros evaluados. Este modelo resultaría útil para estudiar ?in vitro? la capacidad de una bacteria probiótica de regular el desbalance hemostático desencadenado como consecuencia de una respuesta inflamatoria aguda.