Perdida de viabilidad de células epiteliales intestinales de pollos parrilleros bebe por interacción con lectinas dietarias.

BABOT, JAIME DANIEL; ARGAÑARAZ-MARTÍNEZ, ELOY; APELLA, MARÍA CRISTINA; PÉREZ CHAIA, ADRIANA

Resistencia-Chaco

Congreso; XIV JORNADAS ARGENTINAS DE MICROBIOLOGÍA 3ª JORNADA DE MICROBIOLOGÍA E INFECTOLOGÍA DEL NEA.; 2011

Introduccion: En la Argentina, los alimentos para aves de corral se preparan principalmente en base a soja, maiz, trigo, aminoacidos, sales y factores de crecimiento. Los componentes vegetales de estas dietas contienen glicoproteínas denominadas lectinas, altamente resistentes al calor y a la proteolisis, que actuan como un mecanismo de defensa en las plantas frente al ataque de microorganismos e insectos depredadores y tienen efecto negativo en la nutricion animal. En el intestino, se adhieren a la membrana de los enterocitos, se internalizan y afectan el desarrollo de las microvellosidades, la expresion de enzimas del ribete en cepillo, el transporte en la membrana apical y la viabilidad celular. Esto puede llevar a un aprovechamiento ineficiente de la proteina dietaria, efecto importante en las primeras semanas de vida del pollo, en las que el consumo de proteinas es el mayor responsable de la ganancia en peso del animal. Las lectinas de trigo(WGA) y de soja (SBA) presentan gran relevancia para la industria avicola argentina, debido a su presencia en los alimentos balanceados utilizados en la cria de pollos parrilleros. Durante la preparacion de los ingredientes de dietas, el contenido de lectinas se reduce, aunque las cantidades residuales dependen del tipo de tratamiento empleado. Su captura por bacterias probioticas que expresan carbohidratos complementarios en su pared ofrece una alternativa para su eliminacion del medio. Para determinar la proporcion de probioticos a incorporar en las dietas es imprescindible establecer cuales son las concentraciones de estas lectinas que producen danos en las celulas epiteliales intestinales(CEI) de pollos bebe, y la extension de los danos. Objetivo: El objetivo del presente trabajo fue determinar las concentraciones WGA y BSA que producen efectos toxicos sobre celulas epiteliales intestinales de pollos parrilleros bebe, utilizando ConA como lectina testigo con conocidos efectos toxicos sobre CEI. Materiales y metodos: Se sacrificaron pollos parrilleros sanos de 1 semana de vida, obtenidos de establecimientos avícolas locales. La porcion de intestino delgado correspondiente al jejuno fue extraida y la lavada repetidas veces con solucion buffer fosfato salino(PBS) pH 7,40 suplementada con 1 %(v/v) de suero fetal bovino. Las CEI, obtenidas por raspado suave de la superficie interna del jejuno y posterior tratamiento con tripsina-EDTA, fueron lavadas con PBS y resuspendidas en medio de cultivo celular(RPMI) suplementado con 1 % de suero fetal bovino de manera de obtener 1 106 celulas/mL. La suspension de CEI se puso en contacto con soluciones sin(control) y con el agregado de las lectinas Con A, SBA y WGA, siendo las concentraciones finales 5 105 celulas/mL y 1, 25, 50, 100, 150 y 200 μg/mL de cada lectina. Las mezclas se incubaron durante 1 y 2 horas a 42 oC bajo condiciones de microaerofilia. Los efectos citotoxicos de las lectinas se determinaron, previa tincion diferencial con diacetato de fluoresceina e ioduro de propidio, mediante el recuento de celulas viables(verdes) y no viables(rojas) por microscopia de epifluorescencia. Resultados: Las 3 lectinas analizadas presentaron toxicidad sobre CEI que condujo a la muerte celular. WGA y ConA mostraron un efecto citotoxico similar, dependiente en mayor medida del tiempo de exposicion que de su concentracion, obteniendose para la menor concentracion estudiada(1 μg/mL) luego de 2 horas de incubacion porcentajes de muerte superiores que para la maxima concentracion ensayada(200 μg/mL) durante 1 hora. Por otro lado, la citotoxicidad de SBA fue tiempo y concentracion dependiente, obteniendose el mayor porcentaje de muerte (88%) luego de 2 horas de contacto con 200 μg/mL de lectina. Conclusion: Las lectinas WGA y SBA, presentes en los alimentos para pollos parrilleros, producen efectos toxicos que llevan a la muerte de las CEI aun en concentraciones bajas, por lo que desarrollar nuevas estrategias para la eliminacion de lectinas de las dietas o disenar suplementos probioticos que impidan la interaccion de estas proteinas con los enterocitos es de gran importancia para la industria avícola.