CERELA   05438
CENTRO DE REFERENCIA PARA LACTOBACILOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
IDENTIFICACIÓN GENÉTICA Y RESISTENCIA AL PROCESO DE LIOFILIZACIÓN DE LACTOBACILOS VAGINALES POTENCIALMENTE PROBIÓTICOS
Autor/es:
DE GREGORIO PRISCILLA ROMINA ; VERA PINGITORE ESTEBAN; JUÁREZ TOMÁS MARÍA SILVINA; NADER-MACÍAS MARÍA ELENA FÁTIMA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Simposio; 1º Simposio Argentino de los Procesos Biotecnológicos.; 2010
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas U.N.R.
Resumen:
Introducción. En mujeres en edad reproductiva, el mantenimiento del equilibrio ecológico del tracto vaginal, en el cual los lactobacilos son predominantes, se considera crítico para mantener la salud urogenital y la resistencia a infecciones. En las últimas décadas se ha propuesto el empleo de productos probióticos conteniendo lactobacilos para la prevención o tratamiento de infecciones del tracto urogenital femenino. Nuestro equipo de investigación estudia las características benéficas, fisiológicas y tecnológicas de lactobacilos vaginales (LV) para su inclusión en el diseño de productos farmacéuticos dirigidos a reestablecer el ecosistema vaginal femenino y prevenir infecciones. Los objetivos del presente trabajo fueron realizar la identificación genética y evaluar la resistencia al proceso de liofilización de LV, previamente seleccionados por sus propiedades benéficas, relacionadas con características de superficie o producción de sustancias antagónicas. Metodología. Se emplearon 15 LV benéficos preseleccionados, aislados de mujeres de Tucumán. Se realizó su identificación taxonómica a través de la secuenciación del ADN que codifica para el ARN ribosomal 16S (ADNr-16S). Se realizaron reacciones de polimerasa en cadena (PCR) empleando los cebadores MLB y PLB para amplificar la región variable VI del ADNr-16S. Las secuencias obtenidas se analizaron usando el programa BLAST del National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Para conocer su potencial aplicación tecnológica de manera que permanezcan viables a lo largo del almacenamiento y vida de estante, se deben aplicar diferentes metodologías. La liofilización de LV se realizó a partir de microorganismos en fase estacionaria en caldo MRS, los que se concentraron (10X) y resuspendieron en una mezcla lioprotectora de lactosa (12%) + leche descremada (6%). Las suspensiones resultantes se distribuyeron en placas de Petri (15 ml), se congelaron a -70°C durante 24 h, y luego se liofilizaron en un liofilizador de bandeja. Se determinó el número de células viables de LV antes y después del proceso de liofilización por el método de diluciones sucesivas y posterior cultivo en medios agarizados. Resultados. De los 15 LV evaluados, la mayoría de ellos (11 cepas) se identificaron en la especie Lactobacillus gasseri. Las otras especies identificadas fueron L. delbrueckii subsp. bulgaricus, L. rhamnosus y L. reuterii. La resistencia al proceso de liofilizacion evidencia que la viabilidad de los LV disminuyó en diferente grado durante el proceso, dependiendo de la cepa ensayada. El comportamiento de las cepas de L. gasseri evidenció diferencias estadísticamente significativas, lo que indica que la resistencia al proceso de liofilización es una propiedad dependiente de cepa. El microorganismo más resistente al proceso fue L. rhamnosus CRL 1332 en el cual no se observa pérdida de viabilidad. En las cepas L. gasseri CRL 1263, L. gasseri CRL 1307 y L. reuterii CRL 1324 la viabilidad disminuyó en una unidad logarítmica luego de la liofilización, mientras que en el resto de los microorganismos fue de dos o más unidades logarítmicas. Conclusiones. La identificación genética de LV benéficos es un requisito fundamental para los microorganismos que se incluyan en los productos probióticos. El comportamiento de los LV benéficos depende de cada cepa en particular, y no está asociado a género o especie. Los resultados obtenidos permiten avanzar en la selección de los microorganismos más adecuados para su inclusión en el diseño de un producto probiótico de aplicación vaginal.