Producción de exopolisacarido (EPS) y formacion de biofilm en Bacterias Lácticas Vaginales (BLV)

MARÍA CECILIA LECCESE TERRAF; MARÍA SILVINA JUÁREZ TOMÁS; MARÍA ELENA NADER-MACÍAS; CLARA SILVA DE RUIZ

Buenos Aires

Taller; II TALLER INTERDISCIPLINARIO SOBRE “BIOFILMS”; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: La producción de EPS es  el primer paso en el proceso de formación de biofilm y participa en la adhesión a superficies y/o mucosas. Los biofilms son comunidades complejas de microorganismos adheridos a superficies vivas o inertes sobre las que influye notablemente el medio ambiente. Uno de los mecanismos que ejercen los lactobacilos, microbiota predominante en tracto genital para prevenir el ingreso de patógenos, es la formación de un biofilm que enmascararían los receptores de las células epiteliales. Objetivo: evaluar la producción de EPS en BLV y la formación de biofilm en diferentes condiciones. Materiales y métodos: En 15 cepas de BLV de mujeres se realizó el relevamiento de producción de EPS aplicando la técnica de Chapman: a 0,1 ml de cultivo (18 hs en MRS a 37ºC) en portaobjetos se adicionó 0,1 ml de la solución de yodo (0,5 g de I2 y 1g de KI en 100 ml de agua destilada). La producción de exopolisacárido se evidencia con un precipitado marrón. La formación de biofilm se determinó empleando la técnica de O´Toole  en caldo MRS sin tween 80 y en caldo Luria Bertani (LB) variando la cantidad de extracto de levadura (EL) (0,5 y 1%). Las bacterias se incubaron 14 hs en MRS caldo a 37ºC, y 200 μL de los cultivos se diluyeron en 5mL y alícuotas de 200 μL se transfirieron a microplacas de poliestireno, que se incubaron por 72 hs a 37ºC. El biofilm formado se coloreó con cristal violeta al 0,1 % al que se le agregaron 200 μL de etanol 95% para su cuantificación. Se determinó la DO a 570 nm en lector de microplacas. Los ensayos se realizaron por cuadruplicado. Resultados: La producción de EPS (técnica cualitativa) resultó positiva en 14 cepas de BLV, excepto en L.gasseri CRL 1265. El medio MRS sin Tween 80 permitió la formación de biofilm en Lactobacillus reuteri CRL 1324 (DO=1,10); en menor cantidad en L.rhamnosus CRL1332 (DO=0,24) y L.delbrueckii CRL1510 (DO=0,22). En LB con 0,5%  el única productor de biofilm fue L.rhamnosus CRL 1332 (DO=0,6). No se detectó formación de biofilm en LB con 1% de EL. Conclusiones: la metodología aplicada permite evidenciar la producción de EPS y la formación de biofilm de BLV. Se continuarán los estudios dirigidos a dilucidar la naturaleza química de los EPS y el efecto de diferentes factores fisico-químicos que inciden en la producción de EPS y su relación con la formación de biofilm.