Efecto de diferentes componentes de medios de cultivo sobre la formación de biofilm de lactobacilos vaginales

MARIA CECILIA LECCESE TERRAF; MARIA SILVINA JUAREZ TOMAS; MARIA ELENA FÁTIMA NADER; CLARA SILVA DE RUIZ

Tafí del Valle. Tucumán

Jornada; XXVII Jornadas Científicas; 2010

Asociación de Biología de Tucumán

Introducción: Los biofilms son comunidades complejas de microorganismos inmersos en exopolisacáridos adheridas a superficies vivas o inertes sobre las que influye el medio ambiente. Uno de los mecanismos que ejercen los lactobacilos para prevenir el ingreso de patógenos es la formación de un biofilm protector. Las técnicas rutinarias para evidenciar biofilm emplean medios de cultivo estándar en los que las LV no lo forman. Objetivo: evaluar el efecto de componentes de diferentes medios de cultivo que promuevan la formación de biofilm en LV seleccionadas. Materiales y Métodos: 15 cepas de LV de mujeres fueron cultivadas en MRS caldo a 37ºC durante 14 horas y luego subcultivadas en diferentes medios líquidos enriquecidos: a) MRS completo y con omisión individual de Tween 80, MnSO4 y glucosa, y MRS con remoción de los tres componentes, b) LAPTg completo y sin Tween 80 o glucosa. La formación de biofilm se estudió aplicando la técnica de O´Toole. Se tomaron 200 µL de los cultivos en fase estacionaria, se diluyeron en 5mL y alícuotas de 200 µL se transfirieron a microplacas de poliestireno, que se incubaron por 72 hs a 37ºC. El biofilm formado se coloreó con cristal violeta al 1%, al que se le agregaron 200 µL de etanol 95% para su cuantificación. Se determinó la DO a 570nm en lector de microplacas. Los ensayos se realizaron por cuatriplicado. Resultados: el medio MRS con omisión de Tween 80 permitió la formación de biofilm en Lactobacillus reuteri CRL1324 (DO=1,10); en menor cantidad en L. rhamnosus CRL1332 (DO=0,24) y L. delbrueckii CRL1510 (DO=0,22). En LAPTg sin Tween, el biofilm fue menor y L. rhamnosus CRL1332 (DO=0,65) es el que muestra resultados óptimos. En MRS sin glucosa no se formó biofilm y en MRS sin los tres componentes se formó biofilm en bajas cantidades: L. reuteri CRL1324 (DO=0,2), L. rhamnosus CRL1332 (DO=0,2) y L. delbrueckii CRL1510 (DO=0,15). Conclusiones: la técnica aplicada es adecuada para cuantificar el biofilm en LV, y permitirá evaluar el efecto de diferentes factores físicoquimicos. Los resultados obtenidos son promisorios para avanzar en el conocimiento de las características benéficas de LV.