Criopreservación de Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus en distintos medios de suspensión

FORNAGUERA, MARÍA JOSÉ; PÉREZ CHAIA, ADRIANA; MARTOS, GLADYS

Modalidad Virtual

Workshop; Workshop FELACC - Preservación ex situ y Gestión de Datos en Colecciones de Cultivos Microbianos; 2021

FELACC-Federación Latinoamericana de Colecciones de Cultivos

Introducción. La criopreservación a -20°C es una de los métodos más utilizados en la conservación transitoria de microorganismos para el trabajo microbiológico. El éxito de la técnica depende de varios factores, entre ellos, la adición de crioprotectores (CPs) que minimizan daños producidos en las células debido al estrés osmótico y a la formación de cristales de hielo. Hay tres tipos de CPs: 1) Aquellos que penetran tanto la pared como la membrana celular (Ej.: dimetilsulfóxido y glicerol), 2) Los que penetran solo la pared celular pero no la membrana (Ej.: mono y disacáridos, aminoácidos, polímeros de bajo peso molecular) y 3) Los que no penetran la pared celular (polímeros de alto peso molecular, proteínas, polisacáridos, alcoholes, dioles y derivados, dextranos y compuestos complejos como leche en polvo, extracto de levadura, extracto de malta, miel, etc.). Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus (en adelante L. bulgaricus) es una bacteria láctica importante en la industria láctea para la obtención de yogur. El control y uso de la misma en el área del laboratorio, sumado a la preservación a largo plazo, requiere optimizar parámetros que permitan disminuir el índice de muerte celular y asegurar su recuperación metabólica luego del congelamiento.Objetivo: evaluar la respuesta de tres cepas de L. bulgaricus en la criopreservación a -20° C en distintos medios de suspensión. Métodos: se utilizaron cultivos concentrados de tres cepas de L. bulgaricus CRL 449, CRL 656 y CRL 958, de la Colección de Cultivos de CERELA, cultivados en caldo MRS a 37°C hasta fase estacionaria. Los pellets obtenidos de cada cepa se resuspendieron (concentración 5X) en dos medios diferentes: (1) leche descremada reconstituida (LDR) al 10% v/v y (2) leche descremada reconstituida al 10%, extracto de levadura al 0.5% y glucosa al 1% v/v (LEL). Cada cepa en sendos medios de suspensión se congeló y conservó a -20°C durante 12 meses. Cada 3 meses se evaluaron: capacidad acidificante (medición de pH en leche descremada 10% en peachímetro a las 6h) y viabilidad celular por el método de diluciones sucesivas y siembra por microgota en MRS agar. Las placas se incubaron 48 h a 37ºC. Los resultados de sobrevida en cada muestreo se expresaron como índice de muerte celular (Log UFC/ml inicial ? Log UFC/ml en cada muestra). Los datos se analizaron por regresión lineal y se aplicó el Test t para evaluación estadística de dos muestras emparejadas.Resultados. La capacidad acidificante disminuyó a partir de los tres meses de conservación y se estabilizó hasta los 12 meses en las tres cepas evaluadas. L. bulgaricus CRL 449 y CRL 958 mostraron diferencias significativas en los promedios de pH obtenidos cuando se agrega al medio de suspensión extracto de levadura y glucosa (P0,05). Las gráficas de regresión lineal muestran que en las tres cepas existe una fuerte relación entre las variables Índice de muerte-Tiempo de almacenamiento y que es directamente proporcional (0