CERELA   05438
CENTRO DE REFERENCIA PARA LACTOBACILOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
 Frecuencias características de absorción Infrarroja de los grupos funcinales más importantes presentes en P. vulgaris Y S. cohnii y su biofilm
Autor/es:
GAUDIOSO DE ALLORI M. CRISTINA; PORCEL NORMA; DE GREGORIO PRISCILLA ; AYBAR MARIANA; CECILIA DE CASTILLO MARTA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010
Resumen:
El espectro infrarrojo de un microorganismo resulta de la absorción de los modos vibracionales de las moléculas de la célula. La espectroscopia infrarroja-trasformada de Fourier (FT-IR) esun método para detectar estos componentes y depende del estado fisiológico del microorganismo ya que el espectro refleja la composición bioquímica de las células. El objetivo del trabajo fueidentificar los grupos funcionales más importantes y el biofilms de P. vulgaris y de S. cohnii por esta metodología. Se obtuvieron dos espectros de cada cepa: en estado planctónico y biofilm: Para el espectro en estado planctónico: 100 µl de la suspensión de 5x10(ala 5) ufc/ml fue transferida a una ventana de cloruro de plata y secada por vacío moderado entre 60 y 70 mm de Hg para obtener una película transparente y homogénea. Para el espectro del biofilm: La suspension en LB se incubó a 37 °C durante 48 h. Se colocaron 3 g de perlas de polipropileno esterilizadas. Se incubó 24 h. Las perlas se lavaron tres veces de modo suave con aguaestéril. En 2 ml de agua estéril se agitaron para despegar biofilm. Se colocó 100 µl de la suspensión homogénea en una ventana de cloruro de plata y se procedió como en la muestra anterior. Los espectros fueron registrados entre 4.000 y 650 cm-1 en un espectrómetro Perkin Elmer modelo GX (EEUU), equipado con un detector de sulfato de triglicina deuterado. Cada espectro se midió con 4 cm-1 de resolución y resulto del promedio de 100 escaneos. Se realizó el análisis por separado de P. vulgaris y S. cohnii en estado planctónico y de su biofilm. Se compararon las diferencias de los espectros, centrando la atención en el rangoespectral correspondiente a los hidratos de carbono, componente principal del biofilm. La interpretación se realizó en base a tablas con rango espectral y de asignación de absorciones infrarrojas para el análisis de muestras biológicas. En las dos cepas, en el espectro en estado planctónico se observan bandas de mayor intensidad de absorción en las ventanas donde predominan las estructuras lipídicas de pared, membranas celulares, y estructuras proteicas de la células, con respecto a la bandas observadas en la ventana que corresponde a hidratos de carbono. En los espectros del  biofilm se observó, una intensificación de bandas que confirma la mayor presencia del exopolisacárido secretado por las células en la formación del  biofilm. La banda de mayor absorbancia en el espectro del biofilm de P.vulgaris se observó a1017 cm-1, no presentándose esta en el espectro de la bacteria, en S. cohnii se observó la mayor absorbancia para biofilms a 1083cm. Para la comparación de las frecuencias características deabsorción infrarroja de los grupos funcionales en estado planctónico y biofilm se superpusieron ambos espectros. Se seleccionó la región espectral correspondiente a hidratos de carbono y lacorrespondiente al  fingerprint. Este trabajo permite definir una estrategia para la diferenciación de  biofilm de interés en microbiología clínica, basada en espectroscopia vibracional que de-muestra ser rápida, de bajo costo y apropiada resolución.