PROIMI   05436
PLANTA PILOTO DE PROCESOS INDUSTRIALES MICROBIOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
PCR directa utilizando huevos de Spodoptera Frugiperda como templado
Autor/es:
LOTO, FLAVIA; BAIGORI, MARIO DOMINGO; PERA, LICIA MARÍA
Lugar:
Tafi del Valle -Tucumán
Reunión:
Congreso; Asociación de Biología de Tucumán; 2008
Institución organizadora:
Asociación de Biología de Tucumán
Resumen:
Introducción: El ADN es el sustrato esencial para la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los protocolos estándares incluyen un paso de purificación de ADN, pero es laborioso cuando el número de muestras es alto, a pesar de la gran variedad de métodos simples de purificación que existen. Para microorganismos, existen protocolos de PCR que permiten la amplificación directa de secuencias a partir del organismo sin un paso previo de purificación de ADN. Los resultados expuestos en este resumen demuestran que la técnica de PCR directa también sirve para muestras de huevos de Spodoptera frugiperda (Sf). Objetivo. Optimizar la técnica de PCR directa utilizando muestras de Spodoptera frugiperda. Materiales y Métodos: Se utilizaron huevos de Sf directamente como templado. La reacción se realizó para un volumen final de 25 μl: que contenía 21,4 μl agua de ampolla; 5 μl buffer Taq 5X (Promega); 0,1 μl de cada primer JM76 y JM77 y 0,2 de Taq polimerasa (Promega). Se probaron reacciones con 1, 2 y 3 huevos, el control negativo contenía agua en lugar de templado y el control positivo DNA purificado de Sf. Después de una desnaturalización inicial a 97°C durante 6 min, siguieron 35 ciclos de 94°C 1 min, 58°C 1 min y 72°C 2 min, y una extensión final a 72°C 2 min. Las muestras amplificadas fueron cromatografiadas por electroforesis en geles de agarosa al 0,8% y teñidos con bromuro de etidio. Resultados y Discusión: Las muestras con dos huevos amplificaron, mientras que en las que se utilizó 1 huevo hubo menos eficiencia, 1 amplificación sobre 3. En las muestras con 3 huevos no hubo amplificación, quizás debido a un exceso de ADN. El paso de desnaturalización a 97°C durante 3 minutos fue suficiente para la lisis celular y la liberación de la cantidad de ADN óptima para la amplificación. El método es simple, rápido y económico y acelera las aplicaciones de la PCR para muestras de huevos de Sf.