PROIMI   05436
PLANTA PILOTO DE PROCESOS INDUSTRIALES MICROBIOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Regeneración Tisular Ósea mediante el implante de matriz obtenida por Técnicas e ADN Recombinante
Autor/es:
COLETTA D, ; IBAÑEZ FONSECA A,; MISSANA L, ; BUMAGUIN G, ; VITELLI E, ; GARBINO F, ; ZABALZA F ; AMAVET C, ; AIMONE M, ; JAMMAL M, .; ALONSO M,; RODRIGUEZ CABELLO J, ; FELDMAN S
Lugar:
Sierra de la Ventana
Reunión:
Congreso; XXXII Reunión Anual AAOMM.; 2015
Resumen:
La ingeniería de tejidos aplicada a la regeneración ósea pretende, frente a la pérdida del tejido, promover la regeneración del mismo de novo a partir del implante de matrices biodegradables. Este proyecto pretende considerar si, frente a una lesión osteo-femoral de conejos el implante de matrices fabricadas a partir de recombinámeros de tipo elastina (ELRs, de sus siglas en ingles-Elastin-like recombinamers) promueven la regeneración del tejido dañado. ELRs han sido obtenidos mediante estrategias de ADN recombinante en Escherichia coli, transformando a esas bacterias con un plásmido que contiene genes que codifican para ELRs. Estos han sido diseñados genéticamente con el fin de conferir bioactividad en el material:, se les ha unido la secuencia RGD para la adhesión celular, la secuencia para proteína morfogenética ósea 2 ( BMP- 2), y un dominio de reconocimiento por elastasa. Paralelamente el cambio de algunos aminoácidos permitió obtener un hidrogel que es soluble a -4ºC, pero gelifica a T°ambiente. Hemos desarrollado previamente modelo de lesión femoral medial distal de 6 mm de diámetro en conejos hembras de la línea New Zealand de 3 meses de edad. 7 conejos de la misma línea y edad recibieron a posteriori de idéntica lesión, 100 ul de ELRs con jeringas estériles mantenidas previamente a -4ºC, a posteriori de redisolver los liofilizados proteicos de ELRs en PBS estéril con agitación a -4ºC durante 24 hs., todo bajo estrictas normas internacionales de anestesia y tratamiento del dolor. Inmediatamente colocado se observó el proceso de gelificación, previo a la sutura de la herida. Los animales mostraron inmediata recuperación sin observarse alteraciones clínicas respecto a sus pares controles (Ta, estado general, alimentación, movilidad del miembro). Se realizaron estudios radiológicos para considerar la exacta zona del implante. Estudios tomográficos con equipo Toshiba Alexión de 16 detectores, con algoritmo de reconstrucción ósea y reformateo multiplanar y 3D de las muestras óseas obtenidas post-mortem mostraron: en la superficie de la región distal metafisoepifisaria, en la cortical medial, en 6 de las 7 muestras evaluadas, un cierre total del defecto cortical, identificándose en la cuarta muestra de izquierda a derecha la persistencia de un defecto de 1 mm de diámetro en el sitio de lesión., en uno solo de los cortes. En el resto de los cortes, se observó una completa restauración del hueso en las zonas implantadas. Las muestras se sometieron a procesamiento histológico de rutina, previo a su descalcificación con solución morse modificada. Los cortes seriados (5u) se colorearon con H&E y analizaron con microscopio óptico. Los resultados obtenidos, demuestran áreas gruesas de hueso pagetoide neoformado, rica en canales vasculares, alrededor de restos del material implantado. Entre los restos de ELRs, se observo áreas granulares mineralizadas, adoptando formas variadas, tapizada de células similares a osteoblastos. Alejada del contorno óseo, alrededor de ELRs, en médula hematopoyética, se observaron escasas trabéculas óseas, recubiertas de varias capas de osteoblastos y con presencia de osteocitos prominentes. Este trabajo muestra resultados inéditos de regeneración tisular in vivo, mediante el empleo de matriz biodegradable obtenida por técnicas de ADN recombinante, potenciada probablemente por la acción in situ de BMP-2.