PROIMI   05436
PLANTA PILOTO DE PROCESOS INDUSTRIALES MICROBIOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Regeneración Tisular Ósea mediante el implante de matriz obtenida por Técnicas e ADN Recombinante.
Autor/es:
COLETTA DJ; IBAÑEZ FONSECA A; MISSANA L; BUMAGUIN GE; VITELLI E; GARBINO F; ZABALZA F; AMAVET C; AIMONE M; JAMMAL M; ALONSO M; RODRIGUEZ CABELLO J; FELDMAN S
Reunión:
Congreso; XXXII Reunión Anual AAOMM.; 2015
Institución organizadora:
AAOMM
Resumen:
La ingeniería de tejidos aplicada a la regeneración ósea pretende,  frente a la  pérdida del tejido, promover la regeneración delmismo de novo a partir delimplante de matrices biodegradables. Esteproyecto pretende considerar si, frente a unalesión osteo-femoral de conejos el implante de matrices  fabricadas a partir derecombinámeros de tipo elastina (ELRs, de sus siglas eningles ?Elastin-likerecombinamers?) promueven la regeneracióndel tejido dañado. ELRs han sido obtenidos mediante estrategias de  ADN recombinante en Escherichia coli,transformando a esas bacterias con un plásmido que contiene genes que codificanpara ELRs. Estos han sido diseñadosgenéticamente con el fin de conferir bioactividad en el material:, se les haunido  la secuencia RGD para la adhesióncelular, la secuencia para proteína morfogenética ósea 2 ( BMP- 2), y undominio de  reconocimiento por elastasa.Paralelamente el cambio de algunos aminoácidos permitió obtener un hidrogel quees soluble a -4ºC, pero gelifica a T°ambiente. Hemosdesarrollado previamente modelo de lesión femoral medial distal de 6 mm dediámetro en conejos hembras de la línea NewZealand de 3 meses de edad. 7 conejos de la misma línea y edad recibieron aposteriori de idéntica lesión, 100 ul de ELRs con jeringas estériles mantenidas previamente a -4ºC, a posteriori deredisolver los liofilizados proteicos de ELRs en PBS estéril con agitación a-4ºC durante 24 hs., todo bajo estrictas normas internacionales de anestesia ytratamiento del dolor. Inmediatamente colocado se observó el proceso degelificación, previo a la sutura de la herida. Los animales mostraron inmediatarecuperación sin observarse alteraciones clínicas respecto a sus parescontroles (Ta, estado general, alimentación, movilidad del miembro). Serealizaron estudios radiológicos para considerar la exacta zona del implante.Estudios tomográficos con equipo ToshibaAlexión de 16 detectores, con algoritmo de reconstrucción ósea y reformateomultiplanar y 3D de las muestras óseas obtenidas post-mortem mostraron: en la superficie de la región distalmetafisoepifisaria, en la cortical medial, en 6 de las 7 muestras evaluadas, uncierre total del defecto cortical, identificándose en la cuarta muestra de izquierda a derecha lapersistencia  de un defecto de 1 mm dediámetro en el sitio de lesión., en uno solo de los cortes. En el resto de loscortes, se observó una completa restauración del hueso en las zonasimplantadas. Las muestras se sometieron a procesamiento histológico de rutina,previo a su descalcificación con solución morse modificada. Los cortes seriados(5u) se colorearon con H&E y analizaron con microscopio óptico.  Los resultados obtenidos, demuestran áreas gruesasde hueso pagetoide neoformado, rica en canales vasculares, alrededor de restosdel material implantado. Entre los restos de ELRs, se observo áreasgranulares mineralizadas, adoptando formas variadas, tapizada de célulassimilares a osteoblastos. Alejada del contorno óseo, alrededor de ELRs, enmédula hematopoyética, se observaron escasas trabéculas óseas, recubiertas devarias capas de osteoblastos y con presencia de osteocitos prominentes.   Este trabajo muestra resultados inéditos deregeneración tisular in vivo,mediante el empleo de matriz biodegradable obtenida por técnicas de ADNrecombinante, potenciada probablemente por la acción in situ de BMP-2.