CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA Y MOLECULAR DEUN CULTIVO MIXTO DE ACTINOBACTERIAS

PONS, S.; APARICIO J.; POLTI M.; CUOZZO, S.A.,

San Miguel de Tucumán

Jornada; Jornadas Augusto Palavecino; 2015

Facultad de Bioquímica Química y Farmacia

Los antibióticos(ATBs),al entrar en contacto con una población bacteriana, sólo permiten la proliferación de bacterias que presenten mecanismos de resistencia. Por otro lado, RAPD-PCR detecta polimorfismos genéticos (PG), por lo que resulta útil en la diferenciación de bacterias pertenecientes a un mismo género. El estudio de la resistencia a ATBs y RAPD-PCR permite obtener perfiles diferenciales entre microorganismos.Objetivos:Obtener los perfiles de ATB y PG de cuatro actinobacterias y comprobar su sobrevida al finalizar un ensayo de biorremediación. Materiales y métodos: Actinobacterias: Streptomyces M7, MC1, A5 yA. tucumanensis AB0. Sensibilidad a ATB: En cajas de Petri con MH se cultivaron las cepas en césped. Luego se colocaron discos de ATB sobre la superficie, se incubaron a 37 ºC durante 7 días y se midieron los diámetros de los halos de inhibición. Detección de PG: Para RAPD-PCR se utilizaron los cebadores: DA F 5?-GAG GTC GTG CTG ACC GTG CTG CA-3? y DA R 5?-GTT GAT GTG CTG GCC GTC GAC GT-3?. Se ensayaron temperaturas de hibridación entre 50 y 60 ºC, para obtener un perfil único. Los productos se visualizaron en geles de poliacrilamida al 6% teñidos con AgNO3. Resultados:Sensibilidad a ATB: MC1 presentó resistencia a 15 µg mL-1 de minociclina, A5 a 10 µg mL-1 de imipenem, AB0 a 25 µg mL-1 de gentamicina y M7 a 20 µg mL-1 de eritromicina + 70 µg mL-1 de lincomicina. Detección de PG: a 55 °C se obtuvieron perfiles característicos para cada cepa.Conclusión: Los perfiles de ATB y PG de las cepas puras coincidieron con los de las cepas reaisladas del ensayo de biorremediación.Los perfiles característicos permiten confirmar la identidad, y por lo tanto la sobrevida, de las cepas del cultivo mixto al final del proceso de biorremediación.