Caracterización del aislamiento Fusarium oxysporum LY46.2 y de su actividad antimicrobiana, aislado de la Eco-región de Las Yungas

WERNING ML; ARNAU GV; DELGADO OD; FARIÑA JI

Mar del Plata - Bs. As.

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología; 2014

Asociación Micológica Carlos Spegazzini

Numerosos compuestos con actividad biológica han sido aislados de microorganismos pertenecientes a los dominios Archaea, Bacteria y Eucarya, entre los que se incluyen: antibióticos, toxinas, pesticidas, herbicidas, antiparasitarios, hormonas, factores de crecimiento, antioxidantes, biosurfactantes, etc.; los que han servido de sustento a la biotecnología microbiana. En el área de la medicina, el desarrollo de nuevos antibióticos se ha convertido en una prioridad a causa de la frecuente aparición de bacterias patógenas resistentes a los antimicrobianos convencionales. Para hacer frente a este problema, una estrategia que ha ganado atención en los últimos años es la bioprospección, tendiente a la búsqueda directa de metabolitos de importancia biotecnológica a partir de aislamientos microbianos provenientes de ambientes naturales con características particulares, de acuerdo al metabolito de interés. Bajo esta premisa, se aislaron más de 100 especímenes de hongos filamentosos con actividad antimicrobiana a partir de muestras procedentes de la Eco-región de Las Yungas, Tucumán. En el presente trabajo, se llevó a cabo la caracterización de unos de estos aislamientos (LY46.2), así como también de su actividad antimicrobiana. Las características macro- y micro-morfológicas del aislamiento LY46.2, mediante inspección visual de las colonias en diferentes medios de cultivo así como la observación microscópica, mostraron concordancia con lo reportado en la literatura para Fusarium oxysporum. Además se llevó a cabo la identificación molecular mediante del análisis de secuencia de la región del ADNr 18S; ITS1; 5.8S; ITS2; y dominio D1/D2 del ADNr 28S revelando 100% de identidad con Fusarium oxysporum sp. melonis HKU 956. La recuperación y purificación del antimicrobiano se llevó a cabo a partir del sobrenadante libre de células de un cultivo a escala de laboratorio. La producción de actividad antimicrobiana se ensayó en diferentes medios de cultivo y se seleccionó el medio papa glucosado para llevar a cabo el aislamiento y purificación del compuesto antimicrobiano. El mismo se purificó y concentró por extracción en fase sólida en columnas C18. La pureza de la fracción con actividad antimicrobiana se chequeó por HPLC a escala analítica en columna C18. La actividad antimicrobiana del compuesto purificado se evaluó por el método de difusión en placa usando como cepa testigo Salmonella enterica ser. Enteritidis ACC PA03 (seleccionado entre otras cepas patógenas Gram(-) a las que inhibió LY46.2). El cromatograma de HPLC reveló la presencia de un pico mayoritario y dos minoritarios, aunque solamente el pico mayoritario mostró actividad antimicrobiana. Finalmente, empleando membranas de diálisis de diferentes cut-off se estimó que el antimicrobiano, que podría tratarse de un metabolito secundario, posee un peso molecular < 6.000 Da, presentando además carga neta negativa a pH 8,0.