PROIMI   05436
PLANTA PILOTO DE PROCESOS INDUSTRIALES MICROBIOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE LOS CAMBIOS DE EXPRESIÓN DE PROTEÍNAS EN UNA LEVADURA CON CAPACIDAD PARA REMEDIAR AMBIENTES CONTAMINADOS CON COBRE.
Autor/es:
MICHEL L.; IRAZUSTA V
Lugar:
San Miguel de Tucumán
Reunión:
Jornada; V Jornada de Jovenes Investigadores Universidad Nacional de Tucumán; 2012
Resumen:
El cobre juega un papel esencial en el metabolismo celular debido a su versatilidad como catalizador biológico. Dicho metal es requerido como co-factor catalítico de muchas enzimas involucradas en diversos procesos celulares. A pesar de que es necesario en pequeñas cantidades, también tiene la capacidad de reaccionar fácilmente con oxigeno y/o peróxido de hidrogeno dando lugar a especies reactivas del oxigeno (ROS). La especies reactivas del oxigeno tienen la capacidad de dañar los componentes celulares por medio de la oxidación de las proteínas, la degradación o ruptura del DNA y RNA y la peroxidación lipídica. Con el fin de contrarrestar los efectos nocivos de las ROS todos los organismos vivos han desarrollado una serie de mecanismos de defensa, que les permiten vivir en situaciones de estrés. Aquellos organismos que se encuentran en contacto continuo en su medio ambiente con algún agente estresante como podría ser el cobre, generan mecanismos de adaptación a dicho estrés. Entre los organismos con gran capacidad de adaptación a situaciones extremas, destacan las levaduras, que además presentan la ventaja de ser de fácil manipulación y crecimiento bajo condiciones de laboratorio. Candida sp. RCL-3, fue aislada de un canal de drenaje de una planta de filtro de cobre situado en la localidad de Ranchillos (Tucumán), mostrando una alta tolerancia a la presencia de iones cobre II en ensayos cuantitativos y cualitativos. Dicha levadura fue crecida en presencia de sulfato de cobre mostrando una pequeña disminución en su tasa de crecimiento, a una concentración final de 0.5 mM Cu (II). Fueron evaluados las concentraciones del metal por Espectrometría de Absorción Atómica a diferentes tiempos (2, 4, 6, 8, 16, 24, 48, 72 horas), observándose la disminución de dicho metal en el medio de cultivo. A las 16 horas la concentración de cobre disminuyó de 0.5 mM a 0.14 ±0.05 mM, manteniéndose a niveles similares durante las horas estudiadas. Se realizaron pruebas de extracción de proteínas totales mediante el uso de diferentes tampones y protocolos. Se evaluaron los perfiles proteicos totales utilizando geles monodimensionales, observándose cambios en la expresión de las proteínas cuando la levadura fue cultivada en presencia del metal. Con el objetivo de identificar las proteínas diferencialmente expresadas se realizó un estudio bidimensional. Las proteínas fueron separadas según su punto isoeléctrico en una primera dimensión utilizando tiras con gradiente inmovilizado de pH de rango 3-10 no lineal (BioRad). La segunda dimensión se realizo en geles de 13x13 cm a una concentración de 12,5% de acrilamida-bisacrilamida (29:1). Los geles fueron teñidos con nitrato de plata o Azul de Coomassie y las imagenes fueron digitalizada. A partir del análisis de los geles (por triplicado) utilizando el programa ImageMaster 2D Platinum (General Electrics) se observo la sobreexpresión de 40 proteínas en las células crecidas en presencia de 0.5 mM Cu (II). Los spots seleccionados fueron recortados del gel y enviados a identificar por MALDI TOF/TOF (Cequibiem, UBA). Fueron identificadas diferentes proteínas, entre las que destacan ATP sintetasa, Enolasa1, proteínas ribomales, ubiquitina y peroxiredoxinas. Estos resultados podrían implicar que la levadura con capacidad de disminuir el cobre en el medio de cultivo, presenta sobre expresada la maquinaria de defensa contra el estrés oxidativo en general y en particular contra el peróxido de hidrogeno. Los organismos que se encuentran en contacto continuo en su medio ambiente con algún agente estresante como el cobre, generan mecanismos de adaptación a dicho estrés. La levadura Candida sp. RCL-3, fue aislada de un canal de drenaje de una planta de filtro de cobre, mostrando una alta tolerancia a la presencia de iones cobre II. Dicha levadura fue crecida en presencia de 0.5 mM sulfato de cobre mostrando una pequeña disminución en su tasa de crecimiento. Fueron evaluados las concentraciones del metal por Espectrometría de Absorción Atómica a diferentes tiempos. A las 16 horas la concentración de cobre disminuyó de 0.5 mM a 0.14 ±0.05 mM. Se evaluaron los perfiles proteicos utilizando geles monodimensionales, observándose cambios en la expresión de las proteínas en presencia del metal. Para identificar las proteínas diferencialmente expresadas se realizó un estudio bidimensional. El análisis de los geles mostró la sobreexpresión de 40 proteínas, 12 de las cuales fueron identificadas por MALDI TOF/TOF. Destacan 4 peroxiredoxinas, lo que podría implicar que la levadura con capacidad de disminuir el cobre en el medio de cultivo, presenta sobre expresada la maquinaria de defensa contra el estrés oxidativo en general y en particular contra el peróxido de hidrogeno.