Protocolo de desinfección para la introducción in vitro de semillas de Ilex pseudoboxus (Aquifoliaceae).

DOLCE NR; GONZALO AG; MROGINSKI LA; REY,HY

Corrientes, Argentina

Congreso; XXI Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas; 2010

Facultad de Ciencias Agrarias -UNNE

PROTOCOLO DE DESINFECCIÓN PARA LA INTRODUCCIÓN IN VITRO DE SEMILLAS DE Ilex pseudoboxus (AQUIFOLIACEAE) 1   DOLCE, Natalia R.2; GONZALO, Ariel G.3; MROGINSKI, Luis A.4 y REY, Hebe Y.5     El género Ilex L. pertenece a la familia Aquifoliaceae y comprende unas 600 especies distribuidas mayormente en las regiones templadas y tropicales del mundo. Aproximadamente 220 especies son nativas de Sudamérica, de las cuales la que presenta mayor valor económico es I. paraguariensis, a partir de la cual se elabora la yerba mate. La unidad de dispersión del género Ilex es el pireno, formado por la semilla rodeada por el endocarpo leñoso. Al igual que otras especies del género, las semillas de I. pseudoboxus contienen embriones rudimentarios cuando el fruto alcanza la madurez. Como consecuencia de ello, varios meses bajo condiciones apropiadas son requeridos para la maduración del embrión y, aun entonces, el porcentaje de germinación es muy bajo. La técnica de rescate de embriones ha sido empleada exitosamente en muchos cultivos para acelerar la maduración de embriones rudimentarios. En el género Ilex se han desarrollado protocolos para el cultivo in vitro de embriones inmaduros como así también de pirenos enteros o cortados de varias especies, incrementando significativamente los porcentajes de germinación respecto a los métodos convencionales. Sin embargo, uno de los principales problemas que se debe abordar al momento del establecimiento in vitro de pirenos es la elevada carga de microorganismos presente en sus cubiertas seminales. Por ello es necesario un eficiente método de desinfección del material previa a su introducción. Se trabajó con pirenos provenientes de frutos maduros de I. pseudoboxus, inmediatamente después de ser cosechados y luego de 60 días de almacenados en heladera. Los pirenos fueron separados de la pulpa y posteriormente sometidos a diferentes tratamientos de desinfección. Los productos ensayados como desinfectantes fueron: hipoclorito de sodio (NaClO), peróxido de hidrógeno (H2O2) y ácido sulfúrico (H2SO4), en diferentes concentraciones y/o tiempos de exposición, solos o combinados. En todos los casos, luego de la desinfección los pirenos fueron cultivados enteros o cortados sobre medio nutritivo semisólido (agar 0,65 %) constituido por el medio basal de Murashige y Skoog (1962) cuya concentración salina fue reducida 4 veces, con 3% de sacarosa, y la incubación se llevó a cabo en un cuarto climatizado a 27 ± 2º C con un fotoperíodo de 14 h (116 mm m-2 s-1). Los tratamientos más efectivos consistieron en mantener los pirenos en H2O2 10 o 30 vol. en agitación durante 9 o 3 h, respectivamente, y a continuación en etanol 70% durante 1 min seguido de doble inmersión en una solución de NaClO al 2,5% + 0,1% de Tween durante 45 min cada una; posteriormente se realizaron 3 enjuagues con agua destilada estéril. Con estos tratamientos se obtuvieron porcentajes de desinfección de alrededor del 100% tanto de pirenos provenientes de frutos recién cosechados como con 60 días de almacenamiento, y porcentajes de germinación superiores a 70% a partir de pirenos enteros luego de 60 días de realizado el cultivo. En futuros ensayos, este procedimiento proveerá una herramienta para evaluar sobrevivencia en los programas de conservación de semillas del género Ilex.[1] [1] Laboratorio de Cultivo in vitro de Tejidos Vegetales. IBONE-CONICET. FCA. UNNE. Sargento Cabral 2131 - Corrientes, Argentina. 2 Auxiliar de Docencia de 1º Categoría, 3 Auxiliar de Docencia de 2º Categoría, 4 Prof. Titular y 5 Prof. Adjunto de Fisiología Vegetal, FCA. UNNE. E-mail: ndolce@agr.unne.edu.ar Trabajo subsidiado parcialmente por el CONICET y la SGCyT (UNNE).[1]