El gen de la EDPG se expresa diferencialmente en Ilex paraguariensis, en respuesta a estrés hídrico.

ACEVEDO, RAÚL M.; DISTEL, MAURO; SANSBERRO, PEDRO A.

Universidad Nacional del Nordeste

Otro; Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2010; 2010

Universidad Nacional del Nordeste

Ilex paraguariensis (yerba mate) es una planta arbórea que en estado silvestre crece formando parte del sotobosque. Requiere temperaturas tropicales o subtropicales y una elevada humedad ambiente, así como frecuentes precipitaciones del orden de los 1.500 mm anuales. Tradicionalmente se cosechaba de manera extractiva, aprovechando los ejemplares silvestres. Actualmente las plantaciones están expuestas a mayores radiaciones luminosas y a un menor potencial agua en el suelo, ya que se las cultiva de manera extensiva. Esto hace necesario estudiar sus mecanismos de tolerancia a estrés hídrico, y así propiciar el mejoramiento de los cultivos en su nuevo ambiente. El objetivo de este trabajo fue identificar genes que se expresen en forma diferencial frente a estrés hídrico, utilizando la técnica de Differential Display  RT-PCR. Plantas regadas periódicamente, fueron sometidas a estrés hídrico suspendiendo el riego hasta alcanzar un potencial hídrico en el suelo de -3,0 MPa. Se tomaron hojas de muestra a  -0,4; -1,0; -2,0, -3,0 Mpa, y 48 hs luego de regar, después de llegar a -3,0 MPa (rehidratación). Las hojas fueron molidas con nitrógeno líquido y se extrajo el ARN total con un kit comercial (Promega). La síntesis de ADNc de cadena única se realizo por transcripción inversa a partir de la fracción de ARN poliadenilado (ARNm), utilizando un cebador del tipo T12XY, complementario a la cola poli A. Esta fracción de ADNc se amplifico por PCR utilizando como cebadores, el mismo T12XY, y un oligonucleótido  de 10 bases de secuencia aleatoria. Se obtuvo una población de fragmentos de ADNc  de doble cadena, de distintos tamaños; que se separaron por electroforesis en geles de poliacrilamida, y se tiñeron con AgNO3. La banda diferencial se separo del gel, y de ella se eluyó el ADN que luego se amplifico por PCR con los mismos cebadores utilizados anteriormente. Este fragmento se clono en un plásmido comercial (pGEM) y fue secuenciado por Macrogen Inc. (Corea). La secuencia fue analizada en busca de similitud, con la herramienta BLAST del National Center for Biotechnology Information, NCBI. Se encontró una banda con expresión diferencial, que aparece en -3 MPa y persiste 48 hs posteriores al riego, luego de alcanzar -3 Mpa (rehidratación). Su secuencia nucleotídica, de 714 bases, mostró similitud significativa (Score = 234; E value = 6.10-60) con el ARNm precursor de una glicoproteína epidérmica extracelular (EDGP) que Daucus carota expresa en respuesta a estrés biótico y abiótico. La comparación de la secuencia aminoacídica de la EDPG, muestra que tiene proteínas homologas, ampliamente distribuidas en plantas, como legumbres, trigo, algodón y vid. Algunas de ellas cumplirían alguna función en la transducción de señales; y otras, un rol protector en la pared celular. En Ilex paraguariensis, la expresión de este homologo de la EDGP necesita un alto grado de estrés por sequía, y se prolonga a más de 48 hs luego de eliminar su estímulo, lo que indica que está involucrado en un mecanismo de defensa tardío y prolongado.