Localización subcelular del antiporter NHX1 de Lotus tenuis fusionado a GFP.

AFFINITO, A.; ANDRÉS, A.; DEL VAS, M.; DÍAZ PALEO, A; ESPASANDIN, F.; SANSBERRO, P.

Córdoba

Congreso; XXXII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal - XVI Congreso Latinoamericano de Fisiología Vegetal; 2018

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

LOCALIZACIÓN SUBCELULAR DEL ANTIPORTER NHX1 DE LOTUS TENUIS SUBCELLULAR LOCALIZATION OF LOTUS TENUIS NHX1 ANTIPORTER AFFINITO María Agostina1,4, ESPASANDIN Fabiana2, DEL VAS Mariana3, ANDRÉS Adriana4,5, SANSBERRO Pedro2, DÍAZ PALEO Antonio4,51 Centro de investigaciones y transferencia del Noroeste de la provincia de Buenos Aires (CIT NOBA), CONICET-UNNOBA, Monteagudo 2772, Pergamino, Argentina2 Instituto de Botánica del Nordeste (IBONE-CONICET), Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Nordeste, Sargento Cabral 2131, Corrientes, Argentina3 Instituto de Biotecnología, CICVyA, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (IB-INTA), Nicolas Repetto y de los Reseros s/n, Hurlingham, Argentina4 UNNOBA, Monteagudo 2772, Pergamino, Argentina5 EEA INTA Pergamino, Ruta 32 Km 4.5, Pergamino, ArgentinaLotus tenuis es una leguminosa forrajera naturalizada en los campos bajos de la Pampa Deprimida Argentina, que posee alta plasticidad y capacidad de soportar condiciones de estrés abiótico. NHX1 es un antiporter Na+/H+ que en arabidopsis y especies glicófitas de interés agronómico (arroz, vid, otras) está ubicado en el tonoplasto y facilita la compartimentalización de Na+ en las vacuolas, disminuyendo la toxicidad en las células. Para determinar la localización subcelular del antiporter de L. tenuis, se subclonó el cDNA codificante de LtNHX1 en el plásmido binario p*7FWG2, que permite la expresión de esta proteína fusionada a la proteína verde fluorescente (GFP), bajo el control transcripcional del promotor CaMV35S, y confiere resistencia a glufosinato de amonio. Se expresó la construcción resultante de manera transitoria en Nicotiana benthamiana por agroinfiltración y se determinó que la proteína de fusión LtNHX1-GFP se ubica en el tonoplasto de células epidérmicas mediante microscopía confocal. Finalmente, se realizó la transformación de L. tenuis con esta construcción. Se seleccionaron los explantes con glufosinato de amonio y se confirmó la presencia del transgén en las plantas resistentes mediante PCR. La obtención de estas plantas transgénicas permitirá el estudio de la localización subcelular de LtNHX1 en la especie de interés.