IBONE   05434
INSTITUTO DE BOTANICA DEL NORDESTE
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención de líneas transgénicas de Lotus tenuis portadoras del gen reportero GUS (beta-glucuronidasa).
Autor/es:
ESPASANDÍN, F; COLLAVINO, M; RUIZ, O; MROGINSKI, L.; SANSBERRO, P.
Lugar:
Corrientes
Reunión:
Jornada; XXI Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas, FCA-UNNE; 2009
Institución organizadora:
Fac. Cs. Agrarias (UNNE)
Resumen:
Con el propósito de estudiar el desempeño fisiológico ante una situación de estrés osmótico en líneas transgénicas previamente desarrolladas, portadoras del gen de la arginina descarboxilasa, bajo el control del promotor inducible RD29A; en esta segunda etapa  utilizando un promotor similar, fragmentos foliares extraídos de plántulas obtenidas por la germinación in vitro de semillas de una población mejorada por selección recurrente (“INTA-PAMPA”), fueron transformados mediante infección con el vector binario pBi RD29A-GUS de Agrobacterium tumefaciens, portador del gen de la b-glucuronidasa (GUS), bajo el control del promotor inducible RD29A; conteniendo además como marcador selectivo, el gen nptII codificante de neomicina transferasa. A tal fin, los segmentos foliares fueron inoculados con una suspensión de A. tumefaciens (OD600= 0.6) y co-cultivados a 28ºC en el medio de regeneración (MS + ANA y BA) durante 3 días en oscuridad. Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados adicionándose al medio de cultivo kanamicina (30 μg/ml) y cefotaxina (400 μg/ml) e incubados en luz (fotoperíodo 14 hs., 118 mmol·m-2·s-1 PAR) y 27±2ºC. Cada 3 semanas, los explantes fueron subcultivados a medios selectivos frescos a fin de mantener la presión de selección y evitar la proliferación bacteriana. Transcurridos 45 días de cultivo, 69.3±6.1% produjeron 14±0.8 vástagos por explante, los que fueron transferidos a las fases de elongación, enraizamiento y rustificación. Las plantas resistentes a kanamicina fueron analizadas mediante amplificación (PCR) utilizando oligonucleótidos específicos para el gen nptII. Se obtuvieron 29 líneas transgénicas a partir de 160 plantas analizadas, determinando una eficiencia de transformación de 18.1 %. Finalmente, la  integración del transgen fue confirmada mediante análisis de Southern blot. En conclusión, este procedimiento permite la transformación genética y obtención de plantas transgénicas de Lotus tenuis portadoras del gen reportero GUS que se utilizarán en futuros ensayos fisiológicos con el propósito de evaluar el patrón de expresión del promotor RD29A en los diferentes tejidos de la planta y en distintas condiciones de estrés.