Regeneración de plantas a partir de embriones somáticos inducidos en explantes vegetativos de Trichocentrum pumilum (Orchidaceae).

DOLCE, N.R.; MROGINSKI, L.A.

Corrientes

Otro; XXV Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas y de Extensión de la Facultad de Ciencias Agrarias, UNNE.; 2016

Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional del Nordeste

Una vía de regeneración de plantas en sistemas in vitro es la embriogénesis somática, proceso de iniciación y desarrollo de embriones a partir de células que no son producto de la fusión de gametos. En orquídeas, este proceso da lugar a la formación de estructuras esféricas conocidas como PLBs (del inglés Protocorm Like Bodies). Este término describe estructuras que se asemejan a protocormos pero que no derivan de la germinación de embriones cigóticos. Contar con protocolos que permitan la obtención de PLBs para determinadas especies constituye una importante alternativa biotecnológica, dado que estas estructuras, además de permitir clonar masivamente genotipos selectos, constituyen un tipo de explante muy apropiado a la hora de encarar estudios de crioconservación de germoplasma clonal, puesto que presentan tejidos organizados y potencialmente estables desde el punto de vista genético, lo cual garantiza el almacenamiento seguro del germoplasma a largo plazo. El objetivo de este estudio fue evaluar la inducción de PLBs y la regeneración de plantas a partir de explantes vegetativos de Trichocentrum pumilum. El material vegetal utilizado para la realización del experimento provenía de plantas que crecían en condiciones in vitro en un cuarto climatizado a 27±2ºC con fotoperíodo de 14 h e intensidad lumínica de 116 um.m-2.s-1 PPFD o en oscuridad permanente. Se estudió el efecto del tipo de explante utilizado: segmentos basales, medios y apicales de hojas jóvenes provenientes de plantas creciendo en condiciones de luz, y segmentos internodales de plantas etioladas creciendo en condiciones de oscuridad permanente; así como la concentración y combinación de reguladores de crecimiento vegetal adicionados al medio de cultivo: citocininas [N6-bencilaminopurina (BAP), tidiazurón (TDZ) y cinetina (CIN)] y auxinas [ácido naftalenacético (ANA), ácido indolbutírico (IBA), ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)]. En todos los casos, el medio basal utilizado fue MS (Murashige & Skoog, 1962) y la incubación de los cultivos se realizó en un cuarto climatizado a 27±2ºC y oscuridad permanente. Luego de 60 días de iniciado el cultivo, los explantes que presentaban desarrollo de PLBs fueron transferidos a MS libre de reguladores de crecimiento vegetal suplementado con carbón activado (500 mg/L) e incubados en condiciones de luz, para la subsecuente regeneración de plantas. La formación de embriones somáticos fue significativamente afectada por el tipo de explante y los reguladores de crecimiento vegetal; obteniéndose los mayores porcentajes de inducción de PLBs (90-100%), así como de regeneración de plantas, a partir de segmentos basales de hojas jóvenes y de segmentos internodales de plantas etioladas cultivados en MS suplementado con 1-3 mg/L de CIN, sólo o combinado con 0,1 mg/L de 2,4-D. Este trabajo provee un método simple y eficiente para la regeneración de plantas mediante embriogénesis somática directa en explantes vegetativos de T. pumilum, una orquídea nativa del noreste argentino con potencial ornamental; abriendo de esta forma la posibilidad de clonar masivamente genotipos selectos de esta especie e iniciar estudios de crioconservación de dicho germoplasma.