EVALUACIÓN DE MARCADORES MICROSATÉLITES PARA EL ANALISIS MOLECULAR DE POMELO PARANÁ

LEZCANO C.C.; CANTEROS B. I.; PUEBLA A. F.; MORENO, E.M.S.; NISHINAKAMASU V.

Bella Vista

Congreso; VIII CONGRESO ARGENTINO DE CITRICULTURA; 2015

INTA

Pomelo Paraná es una variante de Citrus x paradisi. Se desconoce su origen genético, se consideraque es un híbrido natural cuya exacta ubicación taxonómica respecto a otros pomelos no seha determinado y esto ha causado algunos problemas en la identidad del cultivo para la comercialización.Fue introducido a Misiones desde San Pablo, Brasil en 1981. Su principal característicaes la de una fruta semejante a pomelo, pero difiere de éste por su menor contenido de acidez y laalta resistencia a la enfermedad bacteriana cancrosis de los citrus causada por Xanthomonas axonopodispv. citri que es endémica del NEA. El objetivo fue evaluar marcadores microsatélites (SSR)específicos de Citrus en distintas variedades de pomelo, pummelo e híbridos conocidos. El ADNgenómico total fue extraído de hojas jóvenes de pomelo Paraná, Duncan, Foster, pummelo Chandler,C. grandis x C. paradisi (pomelo triploide) variedad Oro blanco y naranja Valencia. Las muestrasfueron trituradas con nitrógeno líquido y resuspendidas en buffer CTAB. La integridad y calidad delADN fueron evaluadas mediante electroforesis en gel de agarosa 1,5%. Los valores de cuantificacióndel ADN fueron estimados a partir del programa ImageJ y los amplicones obtenidos por PCRconvencional en geles de agarosa 2%. Se utilizaron los pares de primers específicos P73, P94, P620,P1223, P1826. Las reacciones de amplificación se realizaron para un volumen final de 25μl y consistióde una primera reacción de 94ºC 5 minutos, seguido de 32 ciclos de 94ºC 45 segundos, 56ºC 30segundos y 72ºC 45 segundos con una extensión final de 72ºC 10 segundos. Además se utilizaronlos pares de primers CCSM77, CCSM156, CCSM09, CCSM06 para los cuales las reacciones de amplificaciónincluyeron los siguientes pasos: 94ºC 5 minutos, seguido de 30 ciclos de 94ºC 30 segundos,55ºC 30 segundos y 65ºC 30 segundos con una extensión final de 72ºC 5 segundos. La obtenciónde amplicones se verificó en geles de agarosa al 2%, en buffer TAE 1X durante 1 hora 30 minutos a90 W. Para determinar el tamaño de los mismos se utilizó un marcador de peso molecular de 100pares de bases Ladder PB- L. No se distinguieron alelos comunes (