Identificación de genes con expresión constitutiva en hojas de yerba mate, para normalizar los análisis de expresión genética.

ACEVEDO, RAÚL M.; AVICO, EDGARDO H.; LEZCANO, ANDREA I.; RUIZ, OSCAR A.

Corrientes

Encuentro; XXIV Reunión de Comunicaciones Científicas, Técnicas y de Extensión; 2014

Fac. Cs. Agrarias - Universidad Nacional del Nordeste

La PCR en Tiempo Real (qPCR) permite realizar análisis de expresión genética con gran sensibilidad, presición y especificidad. Estas características, la hacen particularmente adecuada cuando se trata de detectar pequeñas variaciones. Dichos cambios en la expresión de un gen entre diferentes muestras, se pueden analizar mediante la cuantificación relativa del ARNm transcripto de ese gen. Para ello, la cuantía de transcriptos detectada para el gen de interes, debe ser normalizada con respecto a la de un gen de referencia definido como ?control interno?, debido a que su nivel de expresión no se ve afectado por el experimento ni por las condiciones fisiológicas; y no presenta variabilidad entre distintos individuos. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue identificar genes con expresión constitutiva en hojas de Ilex paraguariensis, como candidatos de controles internos en qPCR para análisis de expresión genética. Para ello, se realizaron reacciones de PCR en condiciones de baja especificidad con ADNc de yerba mate y cebadores de genes constitutivos descriptos en otras especies vegetales. Los productos de las amplificaciones exitosas, fueron separadas por electroforesis en un gel de agarosa, las bandas obtenidas fueron recortadas, el ADN que contenían se purificó, y se envió a secuenciar a Macrogen (Corea). Utilizando la herramienta BLASTn (National Center for Biotechnology Information) las secuencias resultantes fueron comparadas con las depositadas en GenBank. De esta manera se obtuvieron fragmentos de las secuencias de los genes que codifican para la proteína fijadora de clorofila (chlorophyll-binding protein); subunidad alfa del factor de elongación 1 (alpha subunit of the elongation factor-1); ubiquitina (ubiquitin); tubulina alfa (alpha-tubulin); ciclofilina (cyclophilin); actina 2 (actin2); y actina 11 (actin11). La obtención de estas secuencias específicas de Ilex paraguariensis, son el primer paso para avanzar en los análisis de los niveles de expresión genética. Siendo necesario a continuación, validarlos como gen de expresión constitutiva.